能夠激發(fā)綠色熒光蛋白的發(fā)出熒光的主要有熒光顯微鏡、熒光體視顯微鏡、便攜式熒光蛋白激發(fā)光源、臺式熒光蛋白激發(fā)光源等產(chǎn)品。熒光顯微鏡需要對觀察的目標進行切樣觀察,而手持的便攜式熒光蛋白激發(fā)光源無需破壞觀察目標可以直接觀察,特別是觀察熒光蛋白在種子、愈傷、葉片等的表達,非常方便,佩戴上熒光觀察眼鏡,打開熒光蛋白激發(fā)光源的開關(guān)就可以直接觀察到熒光表達的效果。
LUYOR-3415RG激發(fā)光源效果圖
傳統(tǒng)的熒光顯微鏡觀測熒光蛋白有很多局限性,上海峰志儀器有限公司代理銷售的美國路陽生產(chǎn)的便攜式熒光蛋白激發(fā)觀測燈給轉(zhuǎn)基因研究工作者帶來了便捷性,無需取樣,打開觀測燈直接照射熒光蛋白,肉眼就能清晰看到熒光蛋白在葉片、愈傷、種子、菌落等載體上的表達。無論是綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白或紅色熒光蛋白,一臺觀測燈就能直接觀測2種熒光蛋白的表達?,F(xiàn)上海峰志儀器有限公司技術(shù)工程師針對綠色熒光蛋白的觀測原理、幾種觀測方法介紹如下:
綠色熒光蛋白(GFP):
綠色熒光蛋白GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外),并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍光);發(fā)射光譜峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側(cè)峰。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發(fā)光對細胞的傷害小,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。GFP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下,GFP抗光漂白能力比熒光素強,特別是在450~490nm藍光波長下穩(wěn)定。類似的,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高,抗光漂白能力強,因此適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白,其作用是任何其它酶類報告蛋白。但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學(xué)放大效果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白,比如螢火蟲熒光素酶等。
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