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6孔板轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟

來源:上海吉至生化科技有限公司   2023年04月07日 10:49  

1.轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞于6孔板,5×104每孔,第二天轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到60%-70%每孔。
2.轉(zhuǎn)染前半小時將完、全培養(yǎng)基換無血清培養(yǎng)基1.9 ml。
3.A液:RNA 100 pmol/DNA 2μg (根據(jù)核酸類型不同,用量不同)加入50 ul Opti-MEM無血清培養(yǎng)基,輕輕混勻,室溫靜置5min。
4.B液:脂質(zhì)體使用前輕輕混勻,脂質(zhì)體5ul 加入50 ul Opti-MEM無血清培養(yǎng)基,輕輕混勻,室溫靜置5min。
5.B液加入到A液中,用槍輕輕混勻,室溫靜止20min。
6.將混合液均勻分散慢慢滴加到6孔板細(xì)胞中,邊滴加邊前后左右十字交叉輕輕搖晃。
7.孵箱37℃培養(yǎng)4~6h,然后將無血清培養(yǎng)基換成完、全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
8.mRNA 水平的檢測:在轉(zhuǎn)染后24-48h后,用Real-time PCR的方法在mRNA水平進(jìn)行檢測。
9.蛋白水平的檢測:在轉(zhuǎn)染后48-72h后,用Western-blot或免疫組化的方法在蛋白水平進(jìn)行檢測。


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