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培養(yǎng)基配置與儲存

來源:上海鹿森生物工程有限公司   2023年04月18日 11:18  

實驗材料

基礎培養(yǎng)基(液體或干粉);PET/PETG方形試劑瓶;血清(常規(guī)為FBS/NBS);補充劑;移液槍;電動移液槍;15mL、50mL無菌離心管;滅菌超純水;盒裝無菌吸頭;血清移液管;超凈工作臺;雙抗(青鏈霉素混合液);杯式濾器(0.22μm PES膜);針式濾器 (0.22μm PES膜) 
 

實驗準備

血清準備:
配置培養(yǎng)基前一天,將所需血清從-20℃冰庫取出,放置入2-8℃冰箱緩慢解凍儲存,使用前37℃水浴加熱。
培養(yǎng)基準備:
液體基礎培養(yǎng)基使用前37℃水浴加熱。
 

實驗流程

基礎培養(yǎng)基配置(干粉):

根據(jù)配置體積,選擇合適的滅菌后容器,在容器中倒入約90%體積的超純水,將培養(yǎng)基干粉全部倒入該容器中,用少量超純水將袋內殘留粉末洗出。
攪拌30min使所有成分溶解,待溶液澄清后,根據(jù)說明書加入適當量的碳酸氫鈉(分析純),繼續(xù)攪拌5-10min至溶解,隨后超純水定容并調節(jié)PH值。(過濾會使培養(yǎng)基PH值稍微偏高,所以用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調整PH值至7.20-7.30)
使用0.22μm杯式濾器或0.22μm針式濾器過濾除菌,并按照日常使用規(guī)格分裝入PET/PETG方形試劑瓶中,2-8℃條件下避光保存?zhèn)溆谩?/section>


 


培養(yǎng)基配置:
若含有補充劑,用1000μL無菌吸頭取出適量預熱完成的基礎培養(yǎng)基,注入補充劑西林瓶中,將其充分溶解,再將含有補充劑的培養(yǎng)基轉移入基礎培養(yǎng)基中。

接著按照血清使用比例,用血清移液管吸取適量預熱完成的血清,注入基礎培養(yǎng)基中,蓋上瓶蓋充分混勻。

雙抗加入:
除了特殊篩選系統(tǒng)外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不添加任何抗生素。若為防止細菌、真菌污染,或懷疑細胞污染需要清除細菌,可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液,其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml,鏈霉素為100ug/ml。
培養(yǎng)基保存:
將配置后的培養(yǎng)基2-8℃條件下,避光保存?zhèn)溆茫换虬凑帐褂眯枨蠓盅b入對應規(guī)格的PET/PETG方形試劑瓶中。隔夜或1-2天后觀察培養(yǎng)基,溶液澄清通透且無染菌,方可使用。
使用多余的血清,按照剩余量,可分裝入15mL/50mL的無菌離心管中(防止血清凍存后膨脹泄露問題,離心管工作體積建議為80%),亦可分裝入合適規(guī)格的PET/PETG方形試劑瓶中,并用封口膜封口,-20℃條件下避光保存。


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