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1.吸取900 ul HABA/親和素溶液于1ml比色杯。
2.測(cè)定該溶液在500 nm 處的吸收值并記錄為“A500 HABA/Avidin”。
3.吸取100 ul 生物素標(biāo)記的蛋白于杯中并測(cè)定500 nm 的吸光度值，記為A500 HABA/Avidin/Biotin （數(shù)值必須恒定15s 以上）如果A500 HABA/Avidin/Biotin的值不超過(guò)（≤）0.3，重新稀釋待測(cè)樣品并檢測(cè)。
注：計(jì)算結(jié)果時(shí)必須考慮稀釋度。
計(jì)算Biotin/Protein摩爾比：
①A=生物素化的蛋白毫摩爾濃度＝蛋白濃度（mg/ml）/蛋白的分子量
②B=500nm處的吸光度變化
△A500=（0.9×A500HABA/Avidin）-A500HABA/Avidin/Biotin
③C=生物素的毫摩爾濃度=mmol Biotin/ml反應(yīng)溶液=△A500/（34,000×光程）
④Biotin/Protein摩爾比=C•10•稀釋倍數(shù)/
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