實時熒光定量PCR儀是一種高效的分子生物學實驗儀器，由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成，可以用于測定DNA或RNA的數(shù)量和序列，在醫(yī)學、生物學、農(nóng)業(yè)等領域被廣泛應用。與實時設備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。

下面介紹實時熒光定量PCR儀的操作步驟，為廣大用戶提供參考。

1. 準備樣品

將需要進行PCR擴增的樣品進行提取和準備，如血液、組織、細胞、培養(yǎng)基等。對于DNA或RNA的純度和濃度要求較高，因此需要進行質(zhì)控和標準化。

2. 制備PCR反應體系

根據(jù)實驗需求，制備PCR反應體系，包括PCR試劑、引物、探針、樣品和反應液的比例。反應液一般包括PCR buffer、MgCl2、dNTPs、Taq DNA聚合酶和水。

3. 裝載樣品和反應體系

將制備好的PCR反應體系注入至PCR管中，對于多孔板，可以使用自動化的液體處理系統(tǒng)進行裝載。將PCR管張貼在實時PCR儀的板上。

4. 設置PCR參數(shù)

在實時PCR儀中，設置PCR參數(shù)，包括反應溫度、循環(huán)程序、擴增效率、目標長度等。此外，還需要設置測量周期、檢測通道等。

5. 進行PCR擴增

啟動實時PCR儀，進行擴增過程，從而監(jiān)測PCR反應的進展和結果。實時PCR儀會在反應期間進行熒光檢測和數(shù)據(jù)收集。

6. 數(shù)據(jù)分析

收集實時PCR儀得到的數(shù)據(jù)，利用相關軟件進行數(shù)據(jù)分析和結果解釋?？梢酝ㄟ^熱圖、標準曲線、閾值計算等方式，評估PCR反應的質(zhì)量和數(shù)量，從而對樣品進行檢測和分析。