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HPLC使用操作和注意事項(xiàng)
HPLC流程簡圖：
流程
流程：如右圖所示，溶劑貯器（1）中的流動(dòng)相被泵（2）吸入，經(jīng)〔3〕梯度控制器按一寫的梯度進(jìn)行混后然后輸出，經(jīng)（4）測其壓力和流量，導(dǎo)入（5進(jìn)樣閥（器）經(jīng)（6）保護(hù)柱、（7）分離柱后到（8）檢測器檢測，由（10）數(shù)據(jù)處理設(shè)備處理數(shù)據(jù)或（11）記錄儀記錄色譜圖，（12）餾分收集器收集餾分，（13）為廢液。.
一． 操作步驟
1． 排空狀態(tài)：將吸液頭讓在已經(jīng)超聲的甲醇中，旋松排空閥讓機(jī)器以高流速排走機(jī)器或輸液管的氣泡，3—5分鐘后關(guān)閉排空閥，排空結(jié)束。
2． 沖洗狀態(tài)：以適當(dāng)流速?zèng)_洗機(jī)器核色譜柱大約20分鐘;同時(shí)開啟檢測器，讓檢測器處于預(yù)熱和自檢狀態(tài)。
3． 聯(lián)機(jī)狀態(tài)：打開聯(lián)機(jī)電腦讓色譜工作站和HPLC機(jī)器相連設(shè)定吸收波長，適當(dāng)流速，查看系統(tǒng)壓力是否正常。
4． 用已經(jīng)配好的流動(dòng)相換下甲醇開始走基線，此過程大約20分鐘
5． 當(dāng)基線平穩(wěn)，開始進(jìn)樣準(zhǔn)備。
6． 進(jìn)樣前用進(jìn)樣液清洗六通閥2-3次。
7． 樣品打入機(jī)器開始譜圖。
8． 譜圖完成清洗機(jī)器和關(guān)閉電腦：用甲醇做流動(dòng)相以適當(dāng)流速開始沖洗機(jī)器大約15分鐘，確定甲醇已經(jīng)充滿機(jī)器管道。同時(shí)用甲醇清洗六通閥若干次。退出色譜工作站和關(guān)閉電腦。
9． 整理數(shù)據(jù)填寫結(jié)果。
二． 注意事項(xiàng)
1、進(jìn)樣前樣品處理及注意事項(xiàng)
（1）須用平頭液相注射器進(jìn)樣（禁用氣相尖頭進(jìn)樣針）；
（2）進(jìn)樣試液應(yīng)無顆粒、渾濁和乳化，使用前先用超聲波溶解后，須用0.45um 的過濾膜過濾；
（3）部分裝取樣時(shí)，取樣體積一般小于定管的50%，*裝液相取樣體積取必須是定量環(huán)的5 倍以上
（1）須用平頭液相注射器進(jìn)樣（禁用氣相尖頭進(jìn)樣針）；
（2）進(jìn)樣試液應(yīng)無顆粒、渾濁和乳化，使用前先用超聲波溶解后，須用0.45um 的過濾膜過濾；
（3）部分裝取樣時(shí)，取樣體積一般小于定管的50%，*裝液相取樣體積取必須是定量環(huán)的5 倍以上
2、操作中注意事項(xiàng)：
1）． 流動(dòng)相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。
2） 柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要讓液體過柱子。
3） 所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。
4） 壓力不能太大，不要超過150kgf/cm2 .
5） 因?yàn)榫彌_試劑遇有機(jī)溶劑，會(huì)結(jié)晶，有損色譜柱，所以，每次由有機(jī)相變流動(dòng)相或流動(dòng)相變有機(jī)相均需用蒸餾水清洗。
6） 溫度是影響HPLC的壓力重要原因之一，所以盡量保持恒溫。
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