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四種常見的ELISA方法

來源:上海鹿森生物工程有限公司   2023年06月01日 13:42  

1.直接ELISA

將抗原固定于ELISA板上,然后用酶標(biāo)抗體直檢測抗原。

相較于其它類型的ELISA實驗,直接ELISA實驗步驟少,檢測速度快,不需要用到二抗,避免了交叉反應(yīng),測定結(jié)果不容易出錯。但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的,樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會與ELISA板結(jié)合,實驗背景會比較高。而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗,實驗不太靈活。另外由于沒有使用二抗,信號沒有被放大,降低了測定的靈敏度。

2.間接ELISA

先將抗原結(jié)合到ELISA板上,隨后分兩步進行檢測:首先加入檢測抗體與抗原特異性結(jié)合,隨后加入酶標(biāo)二抗檢測并利用底物顯色。

與直接ELISA相比,間接ELISA用到酶標(biāo)二抗,具有更高的靈敏度,也需要更少的標(biāo)記抗體,更經(jīng)濟。間接ELISA還提供了更大的靈活性,因為不同的一抗能夠與單一標(biāo)記的二抗一同使用。間接ELISA實驗的缺點是存在交叉反應(yīng)的可能性(酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合),可能會增加背景,同時與直接ELISA相比,間接ELISA實驗多了二抗孵育的步驟,實驗周期延長。

3.夾心ELISA

先將捕獲抗體固定于ELISA板孔中,然后加入樣品,接著加入檢測抗體。如果檢測抗體是酶標(biāo)抗體,則可稱為直接夾心ELISA;如果檢測抗體不帶有標(biāo)記,則還需要使用酶標(biāo)二抗與檢測抗體結(jié)合,這種稱為間接夾心ELISA。

夾心ELISA的靈敏度高,它比直接或間接ELISA敏感2-5倍;同時夾心ELISA使用兩種特異性抗體與抗原結(jié)合,擁有很高的特異性。另外夾心ELISA能夠通過直接或間接的方式進行檢測,靈活性較高。夾心ELISA的缺點是對配對抗體要求很高,如果沒有標(biāo)準(zhǔn)化的試劑盒或者已經(jīng)通過測試的配對抗體,則需要進行配對抗體定制并進行優(yōu)化,因為降低捕獲抗體與檢測抗體之間的交叉反應(yīng)是非常重要的。

4.競爭ELISA法

預(yù)先將抗原包被在固相載體上,并加入酶標(biāo)記的特異性抗體。實驗時,加入待檢抗原(或抗體),如果待檢物是抗原,則待檢抗原與預(yù)先包被在固相載體上的抗原競爭結(jié)合酶標(biāo)抗體;如果待檢測物是抗體,則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標(biāo)抗體競爭結(jié)合包被在固相載體上的抗原。通過洗滌洗掉被競爭結(jié)合的酶標(biāo)抗體,最后加底物顯色。需要注意的是顯色結(jié)果與待檢抗原(或抗體)的量成反比。


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