分離培養(yǎng)

　　成纖維細胞的分離培養(yǎng)一開始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究細胞的老化、各種外來因子對細胞的損傷、細胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細胞易于獲取，又易于在體外生長，皮膚成纖維細胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運用，其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對成熟，對其體外生長規(guī)律也有了較全面的認識。

　　原代培養(yǎng)

　　成纖維細胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法，其中組織塊法又因其操作簡便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常，以酶消化法獲得的成纖維細胞懸液在接種后5～10min即可見細胞以偽足初期附著，與 底物形成一些接觸點；然后細胞逐漸呈放射狀伸展，胞體的中心部分亦隨之變扁平；最快者大約在接種后30min，細胞貼附底物即較為wan全，呈現(xiàn)成纖維細胞的形態(tài)。采用組織塊法則大約在接種后2～3天到1周左右，在接種的皮膚組織塊周圍長出細胞。待細胞融合成片，鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時即可進行傳代。一般都采用 胰蛋白酶(trypsin)，將成纖維細胞從底壁消化下來后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細胞分裂時變?yōu)榍蛐?；分裂后又平鋪在附著物的表面成為有突起的扁平細胞。體外培養(yǎng)的成纖維細胞，其生命期限與物種等因素有關(guān)。

　　例如：人胚成纖維細胞約可培養(yǎng)50代；恒河猴皮膚成纖維細胞能傳代超過40代；雞胚成纖維細胞則只有少數(shù)能培養(yǎng)30代；而小鼠成纖維細胞多數(shù)只能生長8代左右。另外，從老年個體取得的成纖維細胞的壽命要比取自年輕者短。由于在細胞傳代和進行體外培養(yǎng)時，細胞的生物學(xué)特性會逐漸發(fā)生一些不同于體內(nèi)的改變，故通常只將前⑩代視這正常細胞，可在此時將生長旺盛的成纖維細胞凍存起來，以備將來復(fù)蘇使用，這在將培養(yǎng)的細胞由動物實驗向人體實驗過渡的過程中必須給予足夠的重視。