圖1 ：RNA疫苗作用過(guò)程[1]

circRNA生產(chǎn)過(guò)程包括：模板制備、體外轉(zhuǎn)錄、DNA模板去除、環(huán)化和純化。在RNA環(huán)化后需要用核糖核酸酶R (Ribonuclease R, RNase R)對(duì)未環(huán)化的RNA進(jìn)行消化，達(dá)到富集circRNA的目的。當(dāng)前主流使用的RNase R主要為進(jìn)口品牌，存在價(jià)格高、貨期久等問(wèn)題，不適合用于大批量生產(chǎn)。翌圣擁有雙向分子酶理性設(shè)計(jì)與定向進(jìn)化平臺(tái)和專門為GMP級(jí)別產(chǎn)品打造的分子酶生產(chǎn)基地，從硬件和軟件上同時(shí)保證產(chǎn)品的品質(zhì)。經(jīng)過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行理性設(shè)計(jì)和基于超高通量單細(xì)胞分選技術(shù)的定向進(jìn)化，翌圣研發(fā)團(tuán)隊(duì)成功開(kāi)發(fā)出一款純度高、消化活性強(qiáng)的RNase R產(chǎn)品，為新一代RNA疫苗/藥物上市提供助力！

翌圣生物RNase R（Cat#14606ES）是一種來(lái)源于大腸桿菌的Mg2+依賴性3'→5'核糖核酸外切酶，它能消化所有的線性RNA，不易消化circRNA、套索RNA或3’端突出末端少于7 個(gè)核苷酸的雙鏈RNA分子，常用于去除線性RNA分子，實(shí)現(xiàn)富集circRNA和套索RNA等非線性RNA的目的。

• 蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%；

• 無(wú)核酸外切酶殘留；

• 與A進(jìn)口品牌RNase R產(chǎn)品消化線性RNA能力相當(dāng)；

• 與A進(jìn)口品牌RNase R產(chǎn)品對(duì)circRNA富集作用相當(dāng)。

圖2：蛋白純度檢測(cè)：使用SDS-PAGE技術(shù)檢測(cè)產(chǎn)品的蛋白純度，從左到右依次為相同產(chǎn)品濃度下不同體積（1 μL，2 μL，3 μL）的結(jié)果，結(jié)果表明翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品蛋白純度≥95%。

圖3：核酸外切酶殘留檢測(cè)：將20 U 翌圣RNase R加入到 0.5 μg λDNA- Hind Ⅲ digest中，于37℃孵育4小時(shí)，之后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳 ，結(jié)果顯示DNA 條帶未發(fā)生變化，說(shuō)明翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品無(wú)核酸外切酶殘留。

圖4：翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品消化線性RNA能力比較：將翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品分別投入含有線性RNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示當(dāng)RNase R產(chǎn)品的投入量達(dá)到2-4 U時(shí)，可觀察到RNA條帶變微弱甚至消失，表明RNase R對(duì)線性RNA分子具有消化作用，且翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品對(duì)線性RNA分子的消化能力相當(dāng)。

圖5：翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品對(duì)circRNA的富集作用比較：將翌圣（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品分別投入含有circRNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示經(jīng)過(guò)翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品處理后的RNA條帶亮度基本無(wú)差別，表明circRNA能耐受RNase R的消化。以上結(jié)果證實(shí)翌圣（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品均能有效用于circRNA富集。

圖6：翌圣（Cat#14606ES）產(chǎn)品與廠家A和B的RNase R消化線性mRNA分子效果比較：將翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與廠家A和B的RNase R產(chǎn)品分別投入含有1 μg 線性mRNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品對(duì)線性RNA的消化效果優(yōu)于廠家A和B的RNase R。(數(shù)據(jù)來(lái)源于深圳**客戶)

參考文獻(xiàn)：

1. Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Circular RNA vaccines against SARS-CoV-2 and emerging variants. Cell. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044

2. Chen L, Wang C, Sun H, et al. The bioinformatics toolbox for circRNA discovery and analysis. Brief Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001