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a549細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)方法

來源:武漢尚恩生物技術(shù)有限公司   2023年06月15日 09:26  
  A549細(xì)胞是一種人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系,是由一種肺腺癌患者的癌細(xì)胞所產(chǎn)生的。這個(gè)細(xì)胞系的主要特性是在無血清條件下生長,它具有許多相似的特征,例如:大多數(shù)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者中觀察到的突變,靈敏性反應(yīng)和惡性腫瘤學(xué)表型。研究表明,在這種細(xì)胞系中還發(fā)現(xiàn)了類似于肺癌患者的一些改變,包括對(duì)抗腫瘤藥物的耐藥性和某些基因的過度表達(dá),這些都使得它成為了一個(gè)非常有用的疾病模型。
 
  由于它與非小細(xì)胞肺癌患者的相似性,因此可以用來更好地理解這種癌癥的生物學(xué)特性以及藥物敏感性。同時(shí),這些細(xì)胞也被用于評(píng)估肺癌治療方案的有效性。廣泛地應(yīng)用于開展高通量的藥物篩選,在這個(gè)模型中,科學(xué)家可以通過測(cè)試不同的化合物和藥品來評(píng)估它們對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響。
 
  a549細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)方法:
 
  1.培養(yǎng)基:常用的培養(yǎng)基包括DMEM(Dulbecco'smodifiedEagle'smedium)和RPMI(RoswellParkMemorialInstitute)1640等。這些培養(yǎng)基中均含有氨基酸、糖類、維生素、微量元素等營養(yǎng)物質(zhì),以滿足其生長需要。
 
  2.細(xì)胞解凍:將凍存的A549細(xì)胞取出,用無菌PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌細(xì)胞,將細(xì)胞孵育在37℃的孵化箱中解凍。解凍后的細(xì)胞可通過離心洗滌去除培養(yǎng)基中的DMSO(二甲基亞砜)。
 
  3.細(xì)胞傳代:當(dāng)培養(yǎng)皿中的細(xì)胞密度達(dá)到80%左右時(shí),可通過胰蛋白酶等消化酶將細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部脫離,并分裝到新的培養(yǎng)皿中。通常情況下,每隔2-3天進(jìn)行一次細(xì)胞傳代。
 
  4.培養(yǎng)條件:在37℃的CO2孵化箱中培養(yǎng),CO2濃度通常為5%。生長時(shí)需要保持適宜的濕度和營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng),并定期更換培養(yǎng)基。
 
  需要注意的是,培養(yǎng)過程中需保持無菌環(huán)境,避免細(xì)菌和真菌等外源性污染。同時(shí),需要注意細(xì)胞密度的控制,過高或過低的密度都會(huì)影響細(xì)胞生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
 
  a549細(xì)胞可以冷凍保存,方法如下:
 
  1.用離心管收集,加入相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)離心,去除培養(yǎng)基。
 
  2.加入含10%DMSO的凍存液,混合均勻。
 
  3.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到專門的冷凍管中,標(biāo)記好樣本編號(hào)和日期。
 
  4.將冷凍管放入冰箱中,以4°C的速率降溫,直到0°C。
 
  5.將冷凍管放入液氮管中,以-1°C/min的速率降溫到-80°C。
 
  6.將細(xì)胞長期存儲(chǔ)在液氮罐中,使用前可快速復(fù)蘇。

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