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細(xì)胞學(xué)堂|MEG-01培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1
細(xì)胞名稱
MEG-01 (人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞）
2
別名
Meg-01; MEG01; Meg01
3
細(xì)胞培養(yǎng)條件
RPMI-1640+10% FBS+1% P/S，37℃；5% CO2
4
生長特性
半貼半懸
5
細(xì)胞形態(tài)
淋巴母細(xì)胞樣
MEG-01是一種巨核母細(xì)胞系，該細(xì)胞來自于一名費(fèi)城染色體(Ph)陽性的慢性粒細(xì)胞性白血?。–ML）患者。1983年由Michinori Ogura, Yasuo Morishima等人從一名55歲患有慢性粒細(xì)胞性白血?。–ML）且處于CML爆發(fā)危機(jī)的男性的骨髓樣本中提取。
MEG-01細(xì)胞沒懸浮的細(xì)胞大多為圓形或者卵圓形，貼壁的細(xì)胞會(huì)伸出偽足。細(xì)胞質(zhì)相對(duì)嗜堿性，并含有少量空泡，還觀察到細(xì)胞質(zhì)突起。單克隆抗體的間接免疫熒光試驗(yàn)顯示，MEG-01細(xì)胞表面的FVIII相關(guān)抗原呈陰性，該抗原在MEG-01細(xì)胞特別是大細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中呈陽性。所有細(xì)胞均呈彌漫性和細(xì)顆粒狀的酸性磷酸酶強(qiáng)陽性。
MEG-01不僅為研究人類巨核細(xì)胞分化和成熟提供研究模型，而且為血小板或蛋白質(zhì)如FVIII相關(guān)抗原、血小板糖蛋白或血小板衍生生長因子（PDGF）等的產(chǎn)生和釋放提供一種有用的研究模型。
培養(yǎng)中始終存在一些黑點(diǎn)樣碎片，不需要特殊處理。大部分細(xì)胞呈不規(guī)則圓形懸浮狀態(tài)，有少量細(xì)胞呈梭形貼壁。
以T25瓶為例
1
該細(xì)胞為半貼壁半懸浮細(xì)胞，其中貼壁細(xì)胞較少或到50%均為正常，可以按懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)方式傳代，貼壁部分吹下即可（如遇吹不下來，可用0.25%胰酶適當(dāng)消化）；
2
維持細(xì)胞密度在3-10×105cells/mL培養(yǎng)，初始接種密度不低于3×105cells/mL，長到10×105cells/mL左右進(jìn)行傳代。建議前期計(jì)數(shù)后操作，后面可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)傳代；
3
每隔3天計(jì)數(shù)操作一次，如密度低于3×105cells/mL可更換小體積容器（如孔板）進(jìn)行培養(yǎng)；
4
根據(jù)細(xì)胞密度選擇其中一種操作方法：
半換液。如密度不足8×105cells/mL則進(jìn)行半換液；緩緩吸出上層一半的培養(yǎng)液，于1200 rpm（250g左右） 3min離心收集細(xì)胞，加入等體積新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕輕吹打3-5次，接回原瓶繼續(xù)培養(yǎng)；
1：2稀釋傳代。如密度接近10×105cells/mL左右，則將細(xì)胞等體積分裝到兩個(gè)新培養(yǎng)瓶，每瓶分別補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基到總體積5mL；
全離心換液或傳代。細(xì)胞每持續(xù)培養(yǎng)超一周可進(jìn)行一次全離心換液或者傳代，不建議頻繁用離心的方式換液或傳代；離心轉(zhuǎn)速推薦1200rpm 3min。
推薦凍存密度：
3~5×106 cells/mL ；
凍存液配比：
55% RPMI-1640 +40% FBS+5%DMSO，需使用程序凍存盒梯度降溫凍存。
生長圖片
圖1：建系文檔中的MEG-01細(xì)胞圖
圖2：ATCC培養(yǎng)圖，來源于ATCC
圖3：普諾賽培養(yǎng)圖
參考文獻(xiàn)：
[1] Ogura M, et al. Establishment of a novel human megakaryoblastic leukemia cell line, MEG- 01, with positive Philadelphia chromosome. Blood 66: 1384-1392, 1985. PubMed: 2998511
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