原理:
PCR利用DNA聚合酶的催化作用,在高溫下依次完成DNA的變性、引物結(jié)合和DNA合成等反應(yīng),從而使DNA序列得到擴(kuò)增。PCR的核心是引物,其能夠與目標(biāo)DNA序列的特定區(qū)域互補(bǔ)配對(duì),使得DNA聚合酶能夠選擇性地合成引物兩側(cè)的DNA分子,從而擴(kuò)增出目標(biāo)DNA序列。
操作過程:
1. DNA模板的制備:將目標(biāo)DNA提取出來,使其成為PCR反應(yīng)的模板。
2. 引物的設(shè)計(jì):根據(jù)目標(biāo)DNA的序列設(shè)計(jì)引物,以便在PCR反應(yīng)中能夠引導(dǎo)DNA擴(kuò)增。
3. PCR管中的混合溶液制備:將模板DNA、引物和PCR反應(yīng)所需的其他試劑加入混合溶液管中,包括四種dNTP(脫氧核苷酸三磷酸)、
4. PCR反應(yīng)條件的設(shè)置:旋轉(zhuǎn)電風(fēng)扇調(diào)節(jié)樣品表面溫度,通透底膜PC管蓋與PC反式培養(yǎng)皿卡合,自動(dòng)調(diào)節(jié)樣品超高速溫升和降溫速率,確保PCR反應(yīng)條件的恒定性。
5. PCR反應(yīng)的進(jìn)行:將PCR反應(yīng)管放入PCR儀中,反應(yīng)程序根據(jù)需要進(jìn)行多次循環(huán),在每一個(gè)循環(huán)中,反應(yīng)管中的溫度會(huì)在一定的溫度區(qū)間中不斷變化,使引物與目標(biāo)DNA互補(bǔ)結(jié)合,DNA鏈變性,然后DNA聚合酶開始合成新DNA鏈來擴(kuò)增目標(biāo)序列,完成DNA擴(kuò)增和PCR反應(yīng)。
6. PCR反應(yīng)產(chǎn)物的檢測(cè)和分離:反應(yīng)結(jié)束后,可以通過凝膠電泳等技術(shù)檢測(cè)PCR反應(yīng)產(chǎn)物,分離目標(biāo)DNA擴(kuò)增產(chǎn)物,進(jìn)行后續(xù)的研究和分析。
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