電泳的實(shí)驗(yàn)步驟

來源：上海吉至生化科技有限公司 2023年07月17日 13:38

1. 用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子。

2. 根據(jù)欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶?jī)?nèi)，定量加入電泳緩沖液（一般20~30 ml）。

3. 放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固。

4. 室溫下 30~ 45 分鐘后凝膠全凝結(jié)，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳內(nèi)槽。

5. 向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面 1mm 為宜，如樣品孔內(nèi)有氣泡，應(yīng)設(shè)法除去。

6. 在 DNA 樣品中加入 10×體積的載樣緩沖液（loading buffer），混勻后，用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi)。

7. 接通電源，紅色為正極，黑色為負(fù)極，切記DNA 樣品由負(fù)極往正極泳動(dòng) ( 靠近加樣孔的一端為負(fù)) 。一般 60～100V 電壓，電泳 20～40min 即可。

8. 根據(jù)指示劑泳動(dòng)的位置，判斷是否終止電泳。

9. 電泳完畢，關(guān)上電源，在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置，并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn) Marker 比較被擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。

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