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大鼠Caspase-2(Caspase-2)ELISA試劑盒實驗操作

來源:上海西唐生物科技有限公司   2011年10月13日 15:20  

上海西唐生物科技有限公司  ,  65333639  www.westang.com  

大鼠Caspase-2(Caspase-2)ELISA試劑盒

 用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內

原理

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Caspase-2 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 Caspase-2與單抗結合,加入生物素化的抗大鼠Caspase-2,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,zui后加終止液,在450nm處測OD值,Caspase-2濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中Caspase-2濃度。

試劑盒組成2-8℃保存)

酶標Coated Wells

96

酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×標本稀釋液(Sample Buffer

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

50ml

標準品Standards4mM/

2

底物工作液(TMB Solution

12ml

*抗體工作液(Biotinylated Antibody

12ml

終止液Stop Solution

12ml

準備試劑與收集血樣

1. 收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8保存48小時;更長時間須冷凍(-20 -70 )保存,避免反復凍融。

2. 準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成4000μM的溶液。設標準8管,管加入標本稀釋液300ul。在*管中加入4000μM的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二。如此反復作對倍稀釋,從第七中吸出300ul棄去。第八為空白對照。

3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

檢測程序

1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37120分鐘。

2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。

3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置3760分鐘。

4. 洗板:同前。

5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置3730分鐘。

6. 洗板:同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應15分鐘。

8. 每孔加入100ul終止液混勻。

9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

結果計算與判斷

1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。

2. 以標準品2000、1000、500、250125、62.5、31.2μM為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。

3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應Caspase-2含量。

試劑盒性能

  1.   靈敏度zui小的Caspase-2 檢測濃度小于15μM。

2. 特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠Caspase-2不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。

3. 重復性:板內、板見變異系數(shù)均小于10%。

注意事項

  1.   以上標準孔及待樣品均建議做復孔,每次測定應同時標準曲線。

 2.   洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。

  3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥

  4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

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