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轉(zhuǎn)化率99.8%！翌圣亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒重磅上市！
轉(zhuǎn)化率99.8%！翌圣亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒重磅上市！
DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾，通過(guò)甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下，形成5-甲基胞嘧啶（5-mC）；多項(xiàng)研究表明，DNA甲基化與腫瘤早期發(fā)生及腫瘤微小殘留相關(guān)，已成為潛力的早篩及MRD的標(biāo)志物。
圖1 亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化原理
亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的前世今生
Hayats等發(fā)現(xiàn)了胞嘧啶可以通過(guò)亞硫酸氫鹽脫氨基且5-甲基胞嘧啶通過(guò)亞硫酸氫鹽脫氨基的速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)比非甲基化的胞嘧啶慢。
這些研究結(jié)果提示亞硫酸鹽使 DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶保持不變，通過(guò)PCR反應(yīng)轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶(T)。
科學(xué)家們將亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化時(shí)間縮短至18h，轉(zhuǎn)化率可達(dá)99%；
在NGS技術(shù)還未到來(lái)之前，亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化已被廣泛使用，但檢測(cè)的甲基化位點(diǎn)有限。
隨著NGS技術(shù)的發(fā)展，WGBS及RRBS等甲基化檢技術(shù)的問(wèn)世，甲基化的研究進(jìn)入一個(gè)新紀(jì)元，可以實(shí)現(xiàn)高通量、單堿基的甲基化分辨率。
通過(guò)不斷的技術(shù)的革新，加上*柱膜技術(shù)或超順磁性氧化硅納米磁珠，亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化時(shí)間可短至90min之內(nèi)，轉(zhuǎn)化率可達(dá)99.5%以上。
表1.2023 NMPA獲批甲基化檢測(cè)產(chǎn)品
（更多的獲批產(chǎn)品可于NMPA查詢(xún)）
Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit(Cat#12223)磁珠法DNA甲基化亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒能轉(zhuǎn)化未發(fā)生甲基化的胞嘧啶，通過(guò)脫氨基反應(yīng)產(chǎn)生尿嘧啶磺酸鹽，發(fā)生甲基化的胞嘧啶則不會(huì)被亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化后的DNA經(jīng)過(guò)高效吸附核酸的磁珠結(jié)合，再通過(guò)洗滌、脫硫和洗脫等步驟富集得到磁珠上的DNA。
圖2 非甲基化C的轉(zhuǎn)化率
圖3 甲基化C的保護(hù)率
293T gDNA不同投入量進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的DNA采用甲基化特性行引物進(jìn)行qPCR，不同樣本投入量之間具有良好的線性關(guān)系。
圖4.不同樣本投入量轉(zhuǎn)化率之間的線性關(guān)系
表2 不同批次試劑的轉(zhuǎn)化率
采用3個(gè)腸癌弱陽(yáng)性的糞便樣本，轉(zhuǎn)化后的DNA采用SDC2甲基化特性行引物進(jìn)行qPCR，12223ES轉(zhuǎn)化的檢測(cè)體系擁有更高的靈敏度。
圖5 SDC2甲基化特異性引物qPCR檢測(cè)結(jié)果
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品應(yīng)用 |
Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit(Cat#12223)磁珠法DNA甲基化亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒 | 12223ES | 甲基化轉(zhuǎn)化 |
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品應(yīng)用 |
Hieff NGS® Methyl-seq DNA library Prep kit for Illumina® V2 甲基化DNA建庫(kù)試劑盒V2 | 12221ES | 甲基化文庫(kù)構(gòu)建 |
DNA Methylation Bisulfite Kit DNA重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化試劑盒 | 12222ES | 甲基化轉(zhuǎn)化 |
ssDNA Assay Kit | 12645ES | 單鏈 DNA（ssDNA)定量 |
1×dsDNA HSAssay Kit | 12642ES | 雙鏈DNA（dsDNA）定量 |
Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina® , Set 1-2
| 12414ES 12415ES | Index |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase | 10145ES | 甲基化轉(zhuǎn)化后PCR擴(kuò)增 |
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