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紫草LAMP鑒定試劑盒使用方法

來源:上海一研生物科技有限公司   2023年07月25日 16:09  

紫草LAMP鑒定試劑盒使用方法:

一、樣品采集:

1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進(jìn)行。

2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。

3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

注:上述樣品建議經(jīng)過增菌后,收集培養(yǎng)物用于檢測。?

二、DNA提?。?/p>

可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。

1、液體培養(yǎng)物:取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

2、固體培養(yǎng)物:挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

4、其他液體標(biāo)本:取標(biāo)本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

注:陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。?

AVPR1A抗利尿激素1A抗體

AVPR1B抗利尿激素受體1B抗體

ARFGEF2二磷酸腺苷核糖基化因子鳥嘌呤核苷酸交換因子2抗體

ATBF1α增強(qiáng)子結(jié)合蛋白1抗體

ATXN10脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)10抗體

AKAP7蛋白激酶A錨定蛋白7抗體

ABCA12腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體12抗體

ABCB9腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體9抗體

ABCD4三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白4抗體

ABLIM3肌動蛋白結(jié)合蛋白LIM3抗體

ACBD3高爾基復(fù)合體相關(guān)蛋白1抗體

ACACA乙酰輔酶A羧化酶1ACCα抗體

ANT1+ANT2+ANT3+ANT4腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運蛋白1、2、3、4抗體

ADAM12去整合素樣金屬蛋白酶12

Phospho-Acetyl CoA Carboxylase磷酸化乙酰輔酶A羧化酶1ACCα抗體

AX2R膜粘連蛋白2受體抗體

AGER晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體抗體

ADCK5ADCK5蛋白抗體

AGFG1艾滋病病毒復(fù)制結(jié)合蛋白抗體

AFP4bAFP4b蛋白抗體

AGFG2HIV-1病毒復(fù)制結(jié)合蛋白2抗體

CABC1伴侶蛋白bc1同源復(fù)合體抗體

ANKRD1心肌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域1抗體


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