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對于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)新手來說，實(shí)驗(yàn)中遇到的一些棘手的問題便無從下手，為大家列出了ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中一些常見的問題以及解決方法，希望對您有所幫助：
問題序號可能原因解決方法顯色淡，靈敏度偏低。
?。?）試劑盒未充分平衡試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）
（2）樣品不適合做ELISA檢測樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件（例如稀釋液的成分）
（3）酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過分干燥防止板過于干燥
?。?）包被抗體遭到破壞操作溫和，移液槍不能碰到孔底
?。?）樣本和抗體孵育條件不合適按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。
?。?）洗滌浸泡時(shí)間過長按照說明書操作。勿人為增加浸泡時(shí)間；
（7）偶聯(lián)HRP試劑污染棄去試劑，重新配置
（8）錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑棄去試劑，重新配置
?。?）TMB底物孵育時(shí)間過短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時(shí)間確定合適的孵育時(shí)間：人為判定-最高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)深藍(lán)色；S4-5有淡藍(lán)色；機(jī)器判定620 nm波長下測定OD值達(dá)到0.6-0.65
（10）樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng)建議做不同稀釋倍數(shù)，確認(rèn)樣本最合適的稀釋倍數(shù)。
(11)酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問題或者波長選擇不對確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測。
（12）酶標(biāo)板不適合做ELISA不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA專用高吸附力板子。背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）
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