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WB（Western Blot，蛋白免疫印跡）是一種常規(guī)的蛋白分析技術(shù)，常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。
WB實(shí)驗(yàn)的基本核心理念是抗原抗體的特異性反應(yīng)，通過(guò)變性膠 SDS-PAGE 將不同分子量的蛋白質(zhì)分離開，然后轉(zhuǎn)移到固相載體 PVDF 膜上，再用脫脂牛奶作為封閉液進(jìn)行封閉和一抗稀釋液進(jìn)行稀釋。待目的蛋白和抗體充分結(jié)合后，用 TBST 洗脫液洗脫掉多余未結(jié)合的一抗，加入帶有 HRP 標(biāo)記的對(duì)應(yīng)二抗，這樣，我們的蛋白+一抗+二抗形成一個(gè)復(fù)合物，加以化學(xué)發(fā)光液，有靶蛋白的位置就會(huì)產(chǎn)生熒光，利用膠片或者化學(xué)發(fā)光儀就可以顯現(xiàn)靶蛋白的條帶顯現(xiàn)。
WB常規(guī)實(shí)驗(yàn)流程：
蛋白提取→蛋白定量→制膠→電泳→轉(zhuǎn)膜→封閉→一抗孵育→一抗洗脫→二抗孵育→二抗洗脫→化學(xué)發(fā)光→數(shù)據(jù)分析。
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