酶標(biāo)抗體的質(zhì)量鑒定與保存
1. 酶活性和抗體效價(jià)測定
采用雙向免疫擴(kuò)散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2顯色反應(yīng)檢測結(jié)合物中抗體效價(jià)和免疫沉淀線中的酶促反應(yīng)。
2. 酶量和IgG量
酶量(mg/ml)=OD403´0.4
IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402´0.42)´0.94´0.62
其中,0.42為酶蛋白本身(0.3)及結(jié)合戊二醛后增加的OD值,0.94為抗體蛋白與醛化酶結(jié)合后,OD280約增加6%,故乘以0.94。兔IgG的OD280=1.0時(shí)為0.62.
過碘酸鈉標(biāo)記法IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402´0.3)´0.94´0.62
標(biāo)記率= OD403/ OD280=0.3-0.6,即一個(gè)抗體分子上結(jié)合1-2個(gè)HRP分子.標(biāo)記率可以大于0.6-0.9。OD403/ OD280=0.4,約相當(dāng)于E/P=1.0。
酶標(biāo)抗體的保存
經(jīng)鑒定合格的酶標(biāo)抗體,由于硫化物及疊氮化物等可與酶結(jié)合,使HRP失活,因此,不能用硫化物及疊氮化物作為防腐劑,可加入等量的60%甘油,小量分裝(0.5ml/支),置4℃~-30℃保存。
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