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Elisa的檢測(cè)方法有哪些?

來(lái)源:北京百奧創(chuàng)新科技有限公司   2023年08月17日 09:47  

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,簡(jiǎn)寫(xiě)ELISAELASA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。

Elisa的檢測(cè)方法有哪些?讓我們一起來(lái)看看吧!

常見(jiàn)的有直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法基雙抗夾心法,其中直接法和競(jìng)爭(zhēng)法應(yīng)用較少,應(yīng)有最多的是雙抗夾心法,讓我們一一來(lái)看看它們是如何操作的吧!

一、直接法

將抗原固定于ELISA班上,然后用酶標(biāo)抗體直檢測(cè)抗原。相較于其他類(lèi)型的ELISA實(shí)驗(yàn),直接ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少,檢測(cè)速度快,不需要用到二抗,避免了交叉反應(yīng),檢測(cè)結(jié)果不容易出錯(cuò),但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的,樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會(huì)與ELISA版結(jié)合,實(shí)驗(yàn)背景會(huì)比較高,而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗,實(shí)驗(yàn)不太靈活。另外由于沒(méi)有使用二抗,信號(hào)沒(méi)有被放大,降低了測(cè)定的靈敏度。

二、間接法

將抗原固定于ELISA班上,隨后分兩步進(jìn)行檢測(cè):首先加入檢測(cè)抗體于抗原特異性結(jié)合,隨后加入酶標(biāo)二抗檢測(cè)并利用底物顯色。于直接ELISA相比,間接ELISA用到酶標(biāo)二抗,具有更高的靈敏度,也需要更少的標(biāo)記抗體,更經(jīng)濟(jì),間接ELISA還提供了更大的靈活性,該方法的缺點(diǎn)有:存在交叉反應(yīng)的可能性(酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合),可能會(huì)增加背景,同時(shí)與直接ELISA相比,間接ELISA實(shí)驗(yàn)多了二抗孵育的步驟,實(shí)驗(yàn)周期延長(zhǎng)。

三、夾心法

被檢測(cè)的抗原包被再兩個(gè)抗體之間其中一個(gè)抗體將抗原固定于載體上,即捕捉抗體,另一個(gè)則是檢測(cè)抗體,此抗體可用酶標(biāo)記后直接測(cè)定抗原的量,或不標(biāo)記,再透過(guò)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量,這兩種抗體必須小心選取,才可以避免交互反應(yīng)貨競(jìng)爭(zhēng)相同額抗原結(jié)合部位。

四、競(jìng)爭(zhēng)法

預(yù)先將抗原包被再固相載體上,并加入酶標(biāo)記的特異性抗體,實(shí)驗(yàn)是,加入待檢抗原(或抗體),如果待檢物是抗原,則待檢抗原于預(yù)先包被再固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)抗體,如果待檢測(cè)物是抗體,則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被再固相載體上的抗原,通過(guò)洗滌洗掉被競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的酶標(biāo)抗體,最后加底物顯色,需要注意的是顯色結(jié)果與待檢抗原(或抗體)的量成反比。競(jìng)爭(zhēng)相對(duì)以上的三種方法更復(fù)雜一些,但以上三種方法都適用于競(jìng)爭(zhēng)法,其主要有點(diǎn)在于可檢測(cè)不純的樣品,且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高,但存在整體敏感性和專(zhuān)一性較差的問(wèn)題。

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