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磁珠法核酸提取都分為哪幾個步驟?

來源:北京百奧創(chuàng)新科技有限公司   2023年08月22日 09:59  

核酸作為一切分子生物學研究的基礎,其提取通常是開啟生物學研究的第一步,而且提取的核酸質量高低也是決定下游實驗成敗的關鍵因素之一。常見的核酸提取方法有酚氯仿抽提法、高鹽沉淀法、柱式法和磁珠法,其中,磁珠法核酸提取都分為哪幾個步驟?讓我們一起來看看吧!

第一步:裂解

核酸必須從細胞或其他生物物質中釋放出來,細胞裂解可通過機械作用、化學作用、酶作用等方法實現(xiàn)。其中,酶作用主要是通過加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或鏈霉蛋白酶)以使細胞破裂,核酸釋放。蛋白酶還能降解與核酸結合的蛋白質,促進核酸的分離。

第二步:結合

磁珠表面帶負電荷,磁珠buffer是高鹽環(huán)境有帶正電荷的鹽離子,樣本被buffer影響,磷酸基團帶負電荷。

第三步:洗滌

核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質、多糖、脂肪等其他生物大分子物質更具親水性,根據(jù)它們理化性質的差異,用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。

用無水乙醇沉淀DNA,這是實驗中最chang用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理性的沉淀劑。當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。

第四步:洗脫

加水或者EB破壞高鹽環(huán)境,形成低鹽環(huán)境,使DNA從磁珠上脫落。

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