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什么是熒光原位雜交?

來源:天津益元利康生物科技有限公司   2023年08月23日 11:37  
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization FISH)是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),是 20 世紀(jì) 80 年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針,按照堿基互補(bǔ)的原則,與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行異性結(jié)合,形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于 DNA 分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列,因而可以探針直接與染色體進(jìn)行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比,熒光原位雜交具有快速、檢測信號強(qiáng)、雜交特異性高和可以多重染色等特點,因此在分子細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域受到普遍關(guān)注。
雜交所用的探針大致可以分類三類
1)染色體特異重復(fù)序列探針,例如 α 衛(wèi)星、衛(wèi)星 III類的探針,其雜交靶位常大于 1Mb,不含散在重復(fù)序列,與靶位結(jié)合緊密,雜交信號強(qiáng),易于檢測;
2)全染色體或染色體區(qū)域特異性探針,其由一條染色體或染色體上某一區(qū)段上極duan不同的核苷酸片段所組成,可由克隆到噬菌體和質(zhì)粒中的染色體特異大片段獲得;
3)特異性位置探針,由一個或幾個克隆序列組成。
探針的熒光素標(biāo)記可以采用直接和間接標(biāo)記的方法。間接標(biāo)記是采用生物素標(biāo)記DNA探針,雜交之后用藕聯(lián)有熒光素親和素或者鏈霉親和素進(jìn)行檢測,同時還可以利用親和素-生物素-熒光素復(fù)合物,將熒光信號進(jìn)行放大,從而可以檢測 500bp 的片段。而直接標(biāo)記法是將熒光素直接與探針核苷酸或磷酸戊糖骨架共價結(jié)合,或在缺口平移法標(biāo)記探針時將熒光素核苷三磷酸摻入。直接標(biāo)記法在檢測時步驟簡單,但由于不能進(jìn)行信號放大,因此靈敏度不如間接標(biāo)記的方法。

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