国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

NGS測序之文庫構建

來源:北京百奧創(chuàng)新科技有限公司   2023年08月24日 10:55  

由于二代測序讀長的限制,不可能一下將一個很長的基因序列測通,因此需要先將長基因序列隨機片段化成小片段,這樣的話,這些片段就可以覆蓋整個基因組。所以需要構建文庫。

一、文庫構建的步驟

文庫構建大致步驟類似,但是各有各自du特的點,例如,RNAseqmiRNAlncRNA,mRNA方法各有差異,具體方法以后有機會再補充。這里以IlluminaPE文庫為例,其流程圖如下圖。

6-2.png


二、文庫構建詳細步驟

1DNA片段化 (Fragment DNA

使用超聲、酶或者加熱的方式將DNA樣品打碎成小片段,一般在300 ~ 800bp之間除非有特殊要求。

2末端修復(End Repair

補平片段化時導致的不平末端。

33' 末端加“A” A-tailing

3‘ 末端加A,轉換為粘性末端,與adapter 互補配對,因為adapter 3‘端有一個突出的T。

4)接頭連接( ligation adaptor

這一步有兩種不同的添加策略如下圖。

6-3.png

左邊的圖是直接在fragment DNA的兩端直接加上full Y-adapter, adapter中已經(jīng)包括了和P5/P7 oligo互補的序列, index, 以及Read1/Read2的測序引物。

右邊的圖是先在fragment DNA的兩端加上PE adapter, 然后再引入和P5/P7 oligo互補配對的序列以及index序列,分兩步:

A. PE adapter添加利用堿基互補配對的原則,加上PE adapterPE adpater中一部分是建庫PCR富集時候需要用的引物序列,另一部分是測序時需要用的引物。

B.PCR 添加 indexP5,P7

Index也稱barcode,用來區(qū)分不同樣本的文庫,因為測序儀一個lane產(chǎn)生數(shù)據(jù)量若干Gb,為了最da化利用測序儀,一次上機常會進行多個樣本文庫混合測序,在后續(xù)分析時,Index用來區(qū)分數(shù)據(jù)是來自哪個樣本。

      PCR富集目的片段

進行PCR擴增,循環(huán)數(shù)與投入的DNA量有關,使得文庫達到上機濃度。

擴增文庫大小質檢

使用Agilent 2100對文庫的insert size進行檢測。

文庫濃度定量

Qubit3.0 進行初步定量 Q-PCR對文庫的有效濃度進行準確定量,至此文庫構建結束。

更多有關NGS測序之文庫構建的相關內容,請聯(lián)系BioDynami建庫試劑盒代理商——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司

image.png














免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
  • 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
合作市| 桦甸市| 迭部县| 衢州市| 灌云县| 玉门市| 邵东县| 互助| 浦北县| 嘉兴市| 会宁县| 锦屏县| 青阳县| 安宁市| 屯留县| 兴业县| 甘孜| 香河县| 鄂州市| 安乡县| 莒南县| 松滋市| 北碚区| 鹤壁市| 壤塘县| 晴隆县| 高台县| 博白县| 安庆市| 永清县| 富民县| 汝南县| 卓资县| 拉孜县| 祁门县| 沈阳市| 黔江区| 永宁县| 曲周县| 上高县| 盐边县|