測(cè)序，測(cè)的是DNA的序列，也就是測(cè)定DNA中脫氧核糖核苷酸的排列順序，它是將DNA化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)橛?jì)算機(jī)可處理的數(shù)字信號(hào)的一個(gè)過(guò)程，我們能從這些經(jīng)過(guò)科學(xué)計(jì)算得出的數(shù)字信號(hào)中找尋到生命之間的奧秘。根據(jù)測(cè)序技術(shù)出現(xiàn)的時(shí)間以及讀長(zhǎng)、通量等特征，分為一代測(cè)序、二代測(cè)序、三代測(cè)序。下面的這些測(cè)序方法，你知道嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、一代測(cè)序

一代測(cè)序技術(shù)，也被稱(chēng)為Sanger測(cè)序。其利用了雙脫氧核苷酸會(huì)終止PCR的原理。比如：一條序列為ATCGCTA，我們進(jìn)行3次的雙脫氧核苷酸，第一次加入雙脫氧核苷酸A和正常的ATCG那么我們會(huì)得到下面兩種序列，A、ATCGCTA。那么我們就知道堿基A在序列的第一個(gè)堿基和第7個(gè)堿基。同理運(yùn)用雙氧核苷酸T和C，就會(huì)得整個(gè)序列的對(duì)應(yīng)堿基的位置BP信息。進(jìn)而得到整條序列的ATCG的序列信息。當(dāng)然這些都是由儀器進(jìn)行檢測(cè)的。一代測(cè)序的特點(diǎn)：速度快，但是一次只能測(cè)一條單一的序列，且最長(zhǎng)也就能測(cè)1000-1500bp。所以被廣泛應(yīng)用在單序列測(cè)序上。簡(jiǎn)單概括就是，一代測(cè)序只能測(cè)一條長(zhǎng)度在1000bp左右的序列。廣泛應(yīng)用于單條序列的突變位點(diǎn)檢測(cè)。

二、二代測(cè)序

二代測(cè)序技術(shù)，也被稱(chēng)為高通量測(cè)序技術(shù)。它解決了一代測(cè)序只能測(cè)一條序列的缺陷。隨著科研的不斷深入，我們開(kāi)始分析一個(gè)物種或樣本中的所有序列信息，這個(gè)時(shí)候一代測(cè)序一次測(cè)一條的方式就無(wú)法滿足我們的需求。二代測(cè)序技術(shù)就是在這樣的情況下誕生的。之所以稱(chēng)其為高通量測(cè)序就是因?yàn)樗淮文軌蛲瑫r(shí)測(cè)很多的序列。我們通過(guò)物理或是化學(xué)的方式將DNA隨機(jī)打斷成無(wú)數(shù)的小片段（250-300bp），之后通過(guò)建庫(kù)（這里就不深入建庫(kù)的原理了）富集了這些DNA片段。接下來(lái)將建完的庫(kù)放入測(cè)序儀中測(cè)序，測(cè)序儀中有著可以讓DNA片段附著的區(qū)域，每一個(gè)片段都有獨(dú)立的附著區(qū)域，這樣測(cè)序儀可以一次檢測(cè)所有附著的DNA序列信息。最后通過(guò)生物信息學(xué)分析將小片段拼接成長(zhǎng)片段。

二代測(cè)序特點(diǎn)：一次能夠測(cè)大量的序列，但是片段被限制在了250-300bp，由于是通過(guò)序列的重疊區(qū)域進(jìn)行拼接，所以有些序列可能被測(cè)了好多次。由于建庫(kù)中利用了PCR富集序列，因此有一些量少的序列可能無(wú)法被大量擴(kuò)增，造成一些信息的丟失，且PCR中有概率會(huì)引入錯(cuò)配堿基。所以三代測(cè)序就這樣誕生了。

三、三代測(cè)序

三代測(cè)序其實(shí)就是對(duì)二代測(cè)序的一個(gè)升級(jí)，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是它同樣一次能測(cè)好多序列，但是測(cè)序的長(zhǎng)度達(dá)到了10kb左右，并且不需要PCR富集序列，直接測(cè)序，這就解決了信息的丟失，以及堿基錯(cuò)配的問(wèn)題。但目前來(lái)說(shuō)三代測(cè)序依然有一定的缺陷：三代測(cè)序技術(shù)依賴(lài)DNA聚合酶的活性，且成本很高，極大地高于二代測(cè)序技術(shù)的錯(cuò)誤率不過(guò)好在三代的錯(cuò)誤是wan全隨機(jī)發(fā)生的，可以靠覆蓋度來(lái)糾錯(cuò)（但這要增加測(cè)序成本）。

二代測(cè)序和三代測(cè)序統(tǒng)稱(chēng)為高通量測(cè)序，又稱(chēng)“下一代測(cè)序”或“深度測(cè)序”。

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