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mRNA合成的關(guān)鍵步驟之一是將質(zhì)粒DNA進(jìn)行線性化，這一步需要使用限制性內(nèi)切酶，IIs型內(nèi)切酶是質(zhì)粒線性化的內(nèi)切酶，因?yàn)樗鼈冊(cè)谧R(shí)別位點(diǎn)下游切割DNA，可確保所設(shè)計(jì)的poly(A)尾的完整性，線性化后的DNA模板上不會(huì)留下“疤痕”，IVT過(guò)程中也不會(huì)添加不需要的核苷酸。BsaI是常見(jiàn)的IIs型內(nèi)切酶之一，在mRNA合作中起著重要作用。
圖1. BsaI識(shí)別位點(diǎn)及切割序列
翌圣的BsaI由大腸桿菌重組表達(dá)，GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)，酶切效率高、星號(hào)活性低、末端完整性良好，可用于mRNA疫苗生產(chǎn)的質(zhì)粒線性化、慢病毒/腺病毒包裝的載體構(gòu)建、質(zhì)粒制備的酶切驗(yàn)證、Golden Gate組裝等。
產(chǎn)品特點(diǎn)
嚴(yán)格按照GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)，確保無(wú)動(dòng)物源成分引入。核酸酶，蛋白酶、宿主DNA/蛋白殘留、支原體、內(nèi)毒素等均嚴(yán)格質(zhì)控確保產(chǎn)品質(zhì)量。
具有高酶切效率，37℃反應(yīng)16 h無(wú)星號(hào)活性，經(jīng)酶切—連接—再酶切測(cè)試末端完整性良好。
將20 U BsaI與底物DNA在37℃孵育 1 h和16 h，瓊脂糖凝膠電泳比較DNA譜帶變化。結(jié)果顯示翌圣BsaI無(wú)非特異性核酸酶殘留。
圖2. 非特異性核酸酶殘留檢測(cè)結(jié)果
通過(guò)“酶切—連接—再酶切”的功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證BsaI酶切的末端完整性，結(jié)果顯示翌圣的BsaI末端完整性良好，與進(jìn)口品牌效果一致。
圖3. BsaI末端完整性檢測(cè)結(jié)果
在37℃下，將BsaI及底物DNA在酶切反應(yīng)體系中共同孵育16h，未檢測(cè)到星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，表明翌圣BsaI 16 h孵育無(wú)星號(hào)活性。
圖4. BsaI星號(hào)活性檢測(cè)結(jié)果
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