什么是定量蛋白質(zhì)印跡?
定量蛋白質(zhì)印跡使不同治療之間的相對比較成為可能。定量蛋白質(zhì)印跡的目標是準確測量蛋白質(zhì)表達的變化。
蛋白質(zhì)印跡用途
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用
信號通路
翻譯后修飾
細胞表面蛋白
RNAi分析
為什么我們需要定量蛋白質(zhì)印跡?
改變生活的療法。農(nóng)作物產(chǎn)量增加。我們所有人都希望通過我們一生的工作做出改變。定量西部片可以成為推進發(fā)現(xiàn)并使世界變得更美好的強大工具。
呈現(xiàn)最佳印跡
定量蛋白質(zhì)印跡要求
信號與加載的蛋白質(zhì)量成正比。
感興趣的蛋白質(zhì)(或“目標”)在檢測的線性范圍內(nèi)進行定量。
內(nèi)部上樣控制可糾正樣品制備、上樣和轉(zhuǎn)移過程中不可避免的變化。
除了這些要求外,實驗變異性還應保持較低,以便可實現(xiàn)復制。
對于定量分析,您必須驗證幾個條件。條帶強度的差異可能是由實驗變異性(如使用不同的抗體或阻斷劑)或真正的生物學變化引起的。在設計實驗之前,確定蛋白質(zhì)印跡過程中變異的來源以及如何最好地控制它們非常重要。
什么是可變性?
您的結(jié)論將始終基于(并受到)實驗中的變異量的影響。您可以使用 CV(變異系數(shù))、σ(標準差)、r 2(決定系數(shù))或其他全方式來定義或測量變異性。減少變異性是最大限度提高精度的關鍵。
確定實驗結(jié)果的重要性是定量西方學者普遍關心的問題。一種方法是定義已處理和未處理樣本之間頻帶信號的百分比變化。實驗變化需要大于您對變異性的測量,例如 CV。因此,為了對微小的變化更有信心,請降低實驗中的 CV。說起來容易做起來難,對吧?為了始終如一地獲得準確的答案,請盡可能消除錯誤源。
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