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HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)攻略

來源:愛必信(上海)生物科技有限公司   2023年09月05日 13:58  

HaCaT細(xì)胞是人類永生化表皮細(xì)胞,由角質(zhì)形成細(xì)胞培育而來的,保留了角質(zhì)形成細(xì)胞分化能力,是非腫瘤來源的人正常皮膚永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株,與正常人角質(zhì)形成細(xì)胞分化特性相似,可以繁殖150代以上,但不是腫瘤細(xì)胞,不具有腫瘤特性。

 

細(xì)胞名稱

HaCaT(人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞)

細(xì)胞來源

一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚

形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

生長特性

貼壁生長

營養(yǎng)體系

89%MEM(abs9503)+10%胎牛血清優(yōu)級(abs972)+1%雙抗(abs9244)+0.2%牛腦垂體提取物(abs9119)

傳代

1:3—1:5,傳代周期2-3天

凍存

無血清細(xì)胞凍存液plus(abs9478)/ 90%培養(yǎng)液+10%DMSO

應(yīng)用

皮膚生物學(xué)和分化研究

 

 

該細(xì)胞較難消化,胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚紅(abs47014938)消化5min作用,有時可能高達(dá)10min,主要由于細(xì)胞不同分化程度和融合度而異。注意消化前一定要用PBS清洗細(xì)胞2-3次,鋪板時一定要均勻,因?yàn)镠aCat成片生長,鋪板不勻會存在局部生長過密難以消化,生長稀疏部分容易消化過度的情況。


圖a 低Ca2+條件下HaCat細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)和圖b高Ca2+條件下HaCat細(xì)胞分化狀態(tài)

 

10%FBS培養(yǎng)體系中的Ca2+足以誘導(dǎo)該細(xì)胞分化,也就是說,正常培養(yǎng)體系下,該細(xì)胞會逐漸分化,分化前細(xì)胞近紡錘形,排列較松散,分化后細(xì)胞向立方體發(fā)展,排列緊密,呈片狀生長。



 

低鈣離子條件下,HaCat增殖更快,K14的表達(dá)僅限于表皮基底層,而K10和總合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)了HaCat細(xì)胞分化表型的獲得,與第6天相比,分化標(biāo)記K10在HaCaT細(xì)胞中的表達(dá)在第14天顯著增加,幾乎100%的細(xì)胞是陽性的,這可能和細(xì)胞密度有關(guān)。

 

牛腦垂體物常用作無血清細(xì)胞培養(yǎng)的生長補(bǔ)充劑,可促進(jìn)上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和黑色素細(xì)胞增殖,廣泛用作各種上皮細(xì)胞和黑色素細(xì)胞培養(yǎng)中的補(bǔ)充劑。此外,其具有抗氧化能力,可對抗過氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死,蛋白質(zhì)氧化,膜破碎和DNA損傷。

 

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Absin胞胞巴適本期推薦產(chǎn)品

貨號

品名

規(guī)格

abs9119

牛腦垂體提取物

20mg/20mg*5

abs972

胎牛血清(優(yōu)級)

500mL

abs9503

MEM培養(yǎng)基(含NEAA,含L-谷氨酰胺,不含丙酮酸鈉,含HEPES)

500mL

abs9244

青霉素-鏈霉素溶液(100×雙抗)

100mL

abs9478

無血清細(xì)胞凍存液plus

100mL


參考文獻(xiàn)


[1] Wilson VG. Growth and differentiation of HaCaT keratinocytes. Methods Mol Biol. 2014;1195:33-41. doi: 10.1007/7651_2013_42. PMID: 24155234.
[2] Colombo I, Sangiovanni E, Maggio R, et al. HaCaT Cells as a Reliable In Vitro Differentiation Model to Dissect the Inflammatory/Repair Response of Human Keratinocytes. Mediators Inflamm. 2017;2017:7435621. doi:10.1155/2017/7435621

 

* 溫馨提示:absin所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究,請勿藥物、家用或其他用途。

 

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Absin特色產(chǎn)品線:

WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

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