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智能水浴冷凝回流提取儀在飼料中維生素 A 檢測(cè)皂化前處理的應(yīng)用

來源:上海那艾實(shí)驗(yàn)儀器有限公司   2023年09月06日 10:11  

 

維生素是動(dòng)物所需的五大營(yíng)養(yǎng)素之一,其中維生素A是視紫紅質(zhì)(感光色素)的重要組成部分,具有維持正常的視覺,促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育,維持上皮結(jié)構(gòu)完整健全和增強(qiáng)動(dòng)物免疫力等作用。為滿足動(dòng)物生長(zhǎng)需求,常在動(dòng)物飼料中添加。

 

 

現(xiàn)行有效的飼料中維生素A測(cè)定的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為GB/T 17817-2010 飼料中維生素 A 檢測(cè)皂化,其前處理方法包括皂化提取法和直接提取法。皂化提取法適用于配合飼料、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料和維生素預(yù)混合飼料中維生素A的測(cè)定。直接提取法僅適用于維生素A含量較高的維生素預(yù)混合飼料中維生素A的測(cè)定。目前皂化提取過程實(shí)驗(yàn)室多自行搭建水浴回流裝置,操作繁瑣,占用人工。本試驗(yàn)對(duì)自行搭建水浴回流裝置與一套集成加熱、磁力攪拌、自動(dòng)升降、定時(shí)啟停、冷熱水雙浴的陣列水浴回流儀進(jìn)行比較,試驗(yàn)證明集成一體的陣列水浴回流儀有效優(yōu)化了皂化前處理過程,達(dá)到了簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)過程,減少人工操作,提升實(shí)驗(yàn)效率的目的。

 

 

1. 材料與方法

 

 

1.1 儀器

 

 

NAI-HL10S智能水浴冷凝回流提取儀

 

 

《中國(guó)藥典》浸出物的測(cè)定法中醇溶性熱浸法 脂肪與脂肪油測(cè)定法中藥浸提回流法

 

 

GB 5009.168-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中淀粉總酸維生素A、D、E脂肪酸的測(cè)定

 

 

GB 31604.5-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品接觸材料及制品 樹脂中提取物的測(cè)定

 

 

GB/T 5009.127-2003 食品包裝用聚酯樹脂及其成型品中鍺的測(cè)定

 

 

GB/T 8021-2003 石油產(chǎn)品皂化值測(cè)定法

 

 

GB/T 17817-2010 飼料中維生素 A 檢測(cè)皂化

 

 

GB/T 10345-2022 白酒分析方法(總酯和酸酯總量的測(cè)定)

 

 

土壤分析技術(shù)規(guī)范 甲亞胺-H比色法 土壤中硼的測(cè)定(提硼回流裝置-石英冷凝回流提取儀)

 

 

 

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品、試劑

 

 

維生素A乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品,含量≥99%

 

 

無水,分析純,經(jīng)檢驗(yàn)無過氧化物;無水乙醇,分析純;甲醇,色譜純;2,6二叔丁基對(duì)甲酚(BHT),分析純;無水硫酸鈉,分析純;氮?dú)猓兌?/span>99.9%);碘化鉀溶液100g/L;淀粉指示劑5g/L;硫代硫酸鈉溶液50g/L;氫氧化鉀溶液500g/L;L-抗壞血酸溶液5g/L;酚酞指示劑10g/L。

 

 

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

 

 

維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱取維生素A乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品34.3mg(精確至0.0001g)于皂化瓶中,按前處理方法進(jìn)行皂化和提取,將提取液全部濃縮蒸發(fā)至干,用正己烷溶解殘?jiān)萌?/span>100mL棕色容量瓶中并稀釋至刻度,混勻,4℃保存。

 

 

維生素A標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確吸取1.00mL維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于100mL棕色容量瓶中,用氮?dú)獯蹈?,用甲醇稀釋至刻度,混勻?/span>

 

 

1.4 前處理方法

 

 

稱取配合飼料10g250mL圓底燒瓶中,加入50mL L-抗壞血酸溶液,使試樣分散、浸濕,加10mL氫氧化鉀溶液,混勻。置于沸水浴上回流30min,不時(shí)振蕩防止試樣粘附在瓶壁上,皂化結(jié)束,分別用5mL無水乙醇、5mL水自冷凝管頂端沖洗其內(nèi)部,取出燒瓶至冷水浴中冷卻至40℃

 

 

定量轉(zhuǎn)移全部皂化液于盛有100mL無水的500mL分液漏斗中,用50mL水分3次沖洗圓底燒瓶并入分液漏斗,加蓋、放氣、隨后混合,激烈振蕩2min,靜置、分層。轉(zhuǎn)移水相于第二個(gè)分液漏斗中,分別用100mL60mL重復(fù)提取兩次,棄去水相,合并三次相。用水每次100mL洗滌提取液至中性。提取液通過無水硫酸鈉脫水,轉(zhuǎn)移至250mL棕色容量瓶中,加100mg BHT使之溶解,用定容。

 

 

從提取液中分取適當(dāng)體積旋轉(zhuǎn)蒸干,殘?jiān)眉状既芙夂筮^0.45um膜過濾,進(jìn)樣測(cè)試。

 

 

1.5 儀器條件

 

 

色譜柱:C18型柱;

 

 

流動(dòng)相:甲醇+水(95:5);

 

 

流速:1.0mL/min

 

 

柱溫:室溫;

 

 

進(jìn)樣量:20ul;

 

 

檢測(cè)波長(zhǎng):326nm。

 

 

2. 結(jié)果與討論

 

 

2.1 皂化前處理裝置對(duì)比

 

 

皂化前處理是維生素A測(cè)試關(guān)鍵前處理過程,傳統(tǒng)人工搭建水浴回流裝置,操作繁瑣,占用人工。皂化前處理過程中,需要不時(shí)振蕩以防止試樣粘附在瓶壁上,實(shí)驗(yàn)人員需要多次拆卸圓底燒瓶,振蕩后再安裝進(jìn)行水浴回流,需要實(shí)驗(yàn)人員一直值守。陣列水浴回流儀可以同時(shí)處理6個(gè)樣品,通過搭載間歇磁力攪拌,免去了人工振蕩過程,加上定時(shí)啟停、自動(dòng)升降功能,實(shí)現(xiàn)無需人員值守。實(shí)驗(yàn)比較了傳統(tǒng)人工搭建水浴回流裝置和陣列水浴回流儀皂化前處理過程,證明陣列水浴回流儀能夠有效優(yōu)化簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)過程、減少人工操作、提升皂化前處理效率。

 

 

表1 智能水浴冷凝回流提取儀參數(shù)設(shè)置

 

 

 

2.2 樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

 

 

稱取10g空白復(fù)合預(yù)混飼料樣品12份,添加10mg維生素A乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品,分別使用自行搭建水浴回流裝置和陣列水浴回流儀進(jìn)行皂化前處理,經(jīng)提取、濃縮后上機(jī)測(cè)試,計(jì)算兩種裝置回收率。自行搭建水浴回流裝置回收率在94.1%~97.8%之間,陣列水浴回流儀回收率在97.3%~99.8%之間,陣列水浴回流儀回收率略優(yōu)于自行搭建水浴回流裝置,測(cè)試結(jié)果見表2。

 

 

表2 不同皂化裝置回收率

 

 

 

2.3 方法重復(fù)性

 

 

分別使用自行搭建水浴回流裝置和陣列水浴回流儀對(duì)同一飼料樣品進(jìn)行前處理,兩種裝置分別進(jìn)行6次平行測(cè)定。自行搭建水浴回流裝置6平行測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.75%,陣列水浴回流儀為1.74%,使用陣列水浴回流儀進(jìn)行皂化前處理重復(fù)性優(yōu)于自行搭建水浴回流裝置,結(jié)果見表3。

 

 

表3 不同皂化裝置重復(fù)性

 

 

 

3. 結(jié)論

 

 

試驗(yàn)分別采用自行搭建水浴回流裝置和陣列水浴回流儀對(duì)飼料中維生素含量進(jìn)行測(cè)定,從整個(gè)測(cè)定過程來看,陣列水浴回流儀通過集成皂化前處理操作,尤其是間歇攪拌功能、自動(dòng)升降功能,大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)過程,減少了人工操作。同時(shí),多樣品自動(dòng)同時(shí)處理,在樣品的準(zhǔn)確度和重復(fù)性上要優(yōu)于人工搭建水浴回流裝置,陣列水浴回流儀可以很好應(yīng)用于飼料中維生素A的測(cè)定。

 

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