輝瑞/BioNTech在新冠mRNA疫苗的生產(chǎn)過(guò)程中使用到HEPES,同時(shí)審評(píng)報(bào)告反復(fù)強(qiáng)調(diào)了該輔料的無(wú)RNase的關(guān)鍵屬性。
結(jié)合2016年BioNTech發(fā)表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES,基本可以推斷BioNTech采用HEPES作為原液中的buffer且已獲批上市的疫苗原液采用HEPES作為緩沖對(duì)。
英國(guó)帝國(guó)理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院傳染病系系主任Robin Shattock是mRNA預(yù)防性疫苗領(lǐng)域的專家,與BioNTech以及PNI等公司都有較為密切的合作。其團(tuán)隊(duì)2021年發(fā)表關(guān)于saRNA體外轉(zhuǎn)錄體系優(yōu)化的文章中,考察篩選了影響saRNA體外轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵影響因素,最終確定了采用40mM濃度的HEPES作為IVT反應(yīng)體系buffer,具有更優(yōu)的體外轉(zhuǎn)錄效果。
四、使用HEPES緩沖體系時(shí)的注意事項(xiàng)
1、由于pai嗪基團(tuán)的存在,當(dāng)HEPES暴露于光線中時(shí),會(huì)產(chǎn)生H2O2,這對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞或其它有生物活性的物體產(chǎn)生毒性,同時(shí)對(duì)氧化還原敏感的物質(zhì)不宜共同使用,因此HEPES作為緩沖液的操作應(yīng)盡量在避光條件下進(jìn)行。
2、HEPES在生化領(lǐng)域常見(jiàn)的使用濃度為10-25mM,當(dāng)濃度低于10mM時(shí)緩沖能力較弱,不能起到較好的緩沖效果,當(dāng)濃度較高時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能具有毒害作用。
艾偉拓長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)注射級(jí)海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保護(hù)劑與緩沖鹽,GMP條件生產(chǎn),中美雙報(bào),供注射用,超低內(nèi)毒素,DNase& RNase free,符合國(guó)際主流藥典標(biāo)準(zhǔn),助力重組蛋白疫苗、mRNA疫苗、腺病毒載體疫苗、脂質(zhì)體、單雙抗、抗體偶聯(lián)藥物等生物制劑生產(chǎn)與中外申報(bào)!
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