国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

哪些因素影響電轉(zhuǎn)效率?

來源:天津益元利康生物科技有限公司   2023年09月08日 09:31  

電轉(zhuǎn),也稱電穿孔法,是通過脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔,將外源分子(DNARNA 、mRNA等)導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi),來改變細(xì)胞的特性,從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的,是實現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么影響電轉(zhuǎn)效率的因素有哪些呢?讓我們一起來看看吧!

一、電轉(zhuǎn)過程

1)電轉(zhuǎn)的完整操作步驟包括電轉(zhuǎn)前操作,電轉(zhuǎn)執(zhí)行和電轉(zhuǎn)后培養(yǎng)。在進行電轉(zhuǎn)前操作時,電轉(zhuǎn)試劑、細(xì)胞與轉(zhuǎn)染底物要進行混勻,如果混勻時過于激烈,會破壞轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成,從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低;
2)在進行電轉(zhuǎn)前操作時,電擊緩沖液的選擇也很重要,由于細(xì)胞對緩沖液的離子組成和滲透壓非常敏感,因此組分與細(xì)胞質(zhì)類似的緩沖液有利于細(xì)胞電擊后的存活;

3)電轉(zhuǎn)執(zhí)行時,需要控制電場強度和脈沖時間。適當(dāng)提高電場強度或延長脈沖時間,能使底物更容易進入細(xì)胞,但細(xì)胞的死亡率也會增加。一般電場強度設(shè)置遵循低電場長時程的原則。如果選擇內(nèi)置優(yōu)化程序的電轉(zhuǎn)系統(tǒng),如LonzaNucleofector系統(tǒng),則可以節(jié)省摸索電場強度和脈沖時間的步驟。

4)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中含有抗生素會影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,這是因為轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞有損傷,這時培養(yǎng)基中的抗生素會進一步損傷細(xì)胞,因此我們建議使用不含抗生素的培養(yǎng)基或PBS;

5)電轉(zhuǎn)后培養(yǎng)要注意,如果使用傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑,轉(zhuǎn)染后4-6h后必須進行換液,否則會由于轉(zhuǎn)染試劑毒性而引起細(xì)胞死亡,最終影響轉(zhuǎn)染效率。

二、細(xì)胞狀態(tài)

1)細(xì)胞污染對細(xì)胞狀態(tài)的影響很大,受到細(xì)菌、真菌或支原體污染的細(xì)胞都會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低、細(xì)胞死亡率增加,尤其是支原體污染悄無聲息,因此一定要做好定期的支原體檢測,確保細(xì)胞狀態(tài);

2)細(xì)胞培養(yǎng)到不同密度都能用于電轉(zhuǎn),但最hao的轉(zhuǎn)化效率是在細(xì)胞的對數(shù)生長期(15代以內(nèi),傳代后2d)。當(dāng)細(xì)胞處于對數(shù)生長期時,有絲分裂較旺盛,表面結(jié)構(gòu)密度比穩(wěn)定期的細(xì)胞差,電轉(zhuǎn)后,細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強,而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA

三、轉(zhuǎn)染底物狀態(tài)

1)不同的轉(zhuǎn)染底物對轉(zhuǎn)染效率都會產(chǎn)生不同的影響,例如質(zhì)粒DNA在大小、用量以及構(gòu)象這三方面都影響著電轉(zhuǎn)效率,IRES導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低,轉(zhuǎn)染mRNA需要調(diào)整洗滌次數(shù)等等;

2)轉(zhuǎn)染試劑與底物的配比,也會影響轉(zhuǎn)染效率,因此需要根據(jù)說明書或參考文獻(xiàn)來進行配比優(yōu)化實驗,選用最佳配比濃度;

3)底物的內(nèi)毒素,也會影響轉(zhuǎn)染效率,內(nèi)毒素含量過高,會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染過程中細(xì)胞狀態(tài)變差,從而增加細(xì)胞死亡率,降低轉(zhuǎn)染效率,因此要對內(nèi)毒素進行控制。

影響電轉(zhuǎn)效率的因素有很多,總結(jié)下來有三方面:電轉(zhuǎn)過程、細(xì)胞狀態(tài)以及轉(zhuǎn)染底物狀態(tài)。只有了解影響電轉(zhuǎn)效率的因素有哪些,我們才能夠“對癥下藥”。更多有關(guān)影響電轉(zhuǎn)效率的因素問題,請聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司


免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
大英县| 昌乐县| 揭西县| 淅川县| 泸州市| 古丈县| 肥西县| 潼关县| 张家港市| 泽库县| 巨野县| 班玛县| 乐亭县| 舞阳县| 五指山市| 太白县| 房山区| 阿鲁科尔沁旗| 谷城县| 英德市| 台山市| 新乡市| 芜湖市| 城市| 佛学| 海口市| 兰考县| 齐河县| 额尔古纳市| 鸡西市| 甘谷县| 西昌市| 梅河口市| 航空| 凤山县| 隆尧县| 偃师市| 安陆市| 噶尔县| 汪清县| 桑植县|