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鏈霉親和素磁珠C-BETA2002操作方案

來(lái)源:武漢艾美捷科技有限公司   2023年09月12日 16:36  

鏈親和素磁珠,也稱(chēng)為SA磁珠,是2.8µm的超順磁性顆粒,與高純形式的鏈親和素共價(jià)偶聯(lián)。該珠可用于捕獲生物素標(biāo)記的底物,包括抗原、抗體和核酸。鏈霉親和素磁珠可用于捕獲生物素標(biāo)記的底物,包括抗原、抗體和核酸。

 

艾美捷鏈霉親和素磁珠

目錄:C-BETA2002

名稱(chēng):鏈霉親和素磁珠-2.8μm

平均直徑:2.8μm

濃度:10 mg/ml

共軛:鏈親和素

無(wú)菌/內(nèi)毒素:無(wú)菌,無(wú)內(nèi)毒素

蛋白質(zhì)濃度:0.6 mg/10 mg珠子

尺寸:2mL/10mL/100mL

特異性:生物素化配體

緩沖液:1xPBS,pH 7.4,0.1%BSA,2mM EDTA

儲(chǔ)存溫度:2℃至8

保質(zhì)期:2

 

鏈霉親和素磁珠協(xié)議:

1.捕獲生物素化核酸

1.1為了確保均勻性,在使用前,用20秒的輕柔渦流將珠子充分混合。將100μL鏈霉親和素磁珠加入1.5 mL微量離心管中。將試管放入磁性支架中,收集珠子。取出并丟棄上清液。

注:建議生物素化分子和磁珠之間使用1:12:1的比例,以實(shí)現(xiàn)磁珠結(jié)合的飽和。生物礦化分子的量需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。

1.2向試管中加入1mL洗滌緩沖液A。將管子倒置幾次或輕輕地渦旋混合。用磁性支架收集珠子,然后取出并丟棄上清液,重復(fù)洗滌兩次。

注:當(dāng)使用體積大于1 mL的磁珠時(shí),建議向磁珠中添加等量的洗滌緩沖液a

1.3加入用洗滌緩沖液A稀釋的500μL生物素化核酸(以達(dá)到2mg/mL的珠濃度),通過(guò)振蕩充分混合,并在室溫下在搖床上孵育30分鐘或在4℃下孵育2小時(shí)。

1.4用磁性支架收集珠子,并將上清液移到新的試管中。

1.5重復(fù)“步驟1.2”兩次,清洗磁珠。

1.6根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求,加入合適的低鹽緩沖液,使磁珠重新懸浮。生物素化核酸的捕獲步驟現(xiàn)已完成。磁珠可以用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。

2.捕獲生物素化抗體/蛋白質(zhì)

2.1為了確保均勻性,在使用前,用20秒的輕柔渦流將珠子充分混合。將100μL鏈霉親和素磁珠加入1.5 mL微量離心管中。將試管放入磁性支架中,收集珠子。取出并丟棄上清液。

注:建議生物素化分子和磁珠之間使用1:12:1的比例,以實(shí)現(xiàn)磁珠結(jié)合的飽和。生物礦化分子的量需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。

2.2向試管中加入1mL洗滌緩沖液B。將管子倒置幾次或輕輕地渦旋混合。用磁性支架收集珠子,然后取出并丟棄上清液,重復(fù)第三次洗滌。

注:當(dāng)使用體積大于1毫升的磁珠時(shí),建議在磁珠中加入等量的洗滌緩沖液B

2.3加入用洗滌緩沖液B稀釋的500μL生物素化抗體/蛋白質(zhì)(以達(dá)到1mg/mL的珠濃度),通過(guò)搖動(dòng)充分混合,并在室溫下在搖動(dòng)器上孵育1小時(shí)。

2.4用磁性支架收集珠子,并將上清液移到新的試管中。

2.5第五次重復(fù)“步驟2.2”,清洗磁珠。

2.6根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求,加入合適的低鹽緩沖液,使磁珠重新懸浮。生物素化抗體/蛋白質(zhì)的捕獲現(xiàn)已完成。磁珠可以用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。

 

洗滌緩沖液:

333.png

 

注:

●將珠粒的pH值保持在6-8之間,避免冷凍和離心。

●避免將磁珠長(zhǎng)時(shí)間暴露在磁場(chǎng)中,以防止磁珠聚集,從而降低結(jié)合活性。

●為了最大限度地減少磁珠的損失,磁分離時(shí)間應(yīng)不少于1分鐘。

●在制備生物素化樣品的過(guò)程中,使用脫鹽柱去除游離生物素。

●轉(zhuǎn)移磁珠時(shí),應(yīng)通過(guò)搖動(dòng)確保徹-底再懸浮,并避免操作過(guò)程中出現(xiàn)氣泡

本品僅供研究使用。


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