分子克隆作為分子生物學(xué)的一項(xiàng)成熟技術(shù)，幾乎每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都或多或少的會(huì)涉及。在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，限制性內(nèi)切酶是克隆產(chǎn)品，但大家也常常因?yàn)橄拗菩詢?nèi)切酶的各種問(wèn)題而感到煩擾。

比如小翌常被問(wèn)到的：

針對(duì)第1個(gè)問(wèn)題，小翌會(huì)簡(jiǎn)單介紹一下什么是限制性內(nèi)切酶，不同內(nèi)切酶的分類如何，讓您對(duì)限制性內(nèi)切酶有一個(gè)更全面的認(rèn)識(shí)。針對(duì)第2~4個(gè)問(wèn)題，翌圣 FuniCut® 系列快速內(nèi)切酶通過(guò)菌株改造，配合優(yōu)化的工藝，可以輕松解決以上難題！

限制性內(nèi)切酶是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割 DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶，簡(jiǎn)稱限制酶。不同的限制性內(nèi)切酶會(huì)識(shí)別不同的DNA 序列，它可以在識(shí)別序列內(nèi)或距識(shí)別序列不遠(yuǎn)的位置處切割DNA，酶切之后會(huì)形成不同類型的產(chǎn)物，如圖1中的BamHI形成5’粘性末端產(chǎn)物，KpnI形成3’粘性末端產(chǎn)物，EcoRV形成平末端產(chǎn)物。

圖1. BamHI、KpnI、EcoRV 酶切示意圖

限制性內(nèi)切酶除了于分子克隆實(shí)驗(yàn)中外，它還可以應(yīng)用于疫苗研發(fā)生產(chǎn)、基因測(cè)序、SNP鑒定、ddPCR等領(lǐng)域。

限制性內(nèi)切酶的命名主要是根據(jù)細(xì)菌的屬名、種名、菌株或血清型、發(fā)現(xiàn)的順序而定，以BstEII為例，命名規(guī)則如下表一所示：

表1. 限制性內(nèi)切酶的命名規(guī)則

根據(jù)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度、作用方式與輔因子的區(qū)別，限制性內(nèi)切酶可分為四大類，表2總結(jié)了各類的特點(diǎn)和典型酶種。

表2. 不同限制性內(nèi)切酶的區(qū)別

除了以上分類，根據(jù)識(shí)別和切割位點(diǎn)的異同可以分為3類，如下表3所示：

表3. 同裂酶、異裂酶和同尾酶對(duì)比

針對(duì)目前市面上一些限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品需要過(guò)夜酶切，花費(fèi)時(shí)間和精力，并且還容易出現(xiàn)酶切產(chǎn)物不正確的情況。翌圣FuniCut®快速限制性內(nèi)切酶為您排憂解難，通用緩沖液，5 min完成精準(zhǔn)酶切，讓您的酶切實(shí)驗(yàn)不再有煩惱!

圖2. 5 min高效完成單、雙和三酶切效果圖

圖3. 與不同品牌buffer兼容的酶切效果圖

分別使用翌圣、T*、N*品牌的HindIII、NheI、PstI、XbaI、XhoI快速內(nèi)切酶，以λDNA為底物，按照各品牌推薦的實(shí)驗(yàn)體系，進(jìn)行過(guò)夜酶切（16 h），酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明翌圣限制性系列產(chǎn)品過(guò)夜酶切，表現(xiàn)出超低的星號(hào)活性。

圖4. 與不同品牌的限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品過(guò)夜酶切效果

以 FuniCut® EcoRI、XbaI、SacI快速限制性內(nèi)切酶，分別以1 μg、1.5 μg質(zhì)粒為底物，酶切5 min，酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明翌圣限制性系列產(chǎn)品能輕松處理一定程度的過(guò)量底物。

圖5. 分別酶切1、1.5 μg底物的酶切效果圖

客戶分別使用N*品牌和翌圣的BamHI+XbaI對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)，結(jié)果表明翌圣限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品效果媲美N*。（來(lái)源于上海客戶）

圖6. N*品牌和翌圣的雙酶切效果圖