細胞培養(yǎng)(cell culture)是指在體外模擬體內環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。
細胞培養(yǎng)操作步驟:(供參考)
吸走多余培養(yǎng)基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞;
吸干凈PBS后加入1mL0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化;(細胞對于消化比較敏感,消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài),導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時即可終止,禁止消化到細胞漂浮?;靹蚣毎麜r盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
加入6-8ml培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細胞混勻;
將混勻的細胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)(建議T25瓶加10-12ml培養(yǎng)基,10cm皿加12-15ml);傳代比例: 不同細胞生長速度不一,具體傳代比例視細胞生長速度而定,大部分細胞適用1:3-1:4傳代,生長較慢的細胞可以1:2傳代。
細胞冷凍保存:
1.凍存液:92%培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實驗室條件自行選擇)。
2.降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過夜后液氮保存。
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