1) 非離子性親水性樣品和離子性親水性樣品
鹽溶液和緩沖液經(jīng)常被用來作為流動相。典型的代表有以下幾種:
鹽溶液----氯化鈉水溶液、硝酸鈉水溶液、硫酸鈉水溶液、硫酸鈣水溶液、硫酸銨水溶液
緩沖液----磷酸緩沖液、三鹽酸緩沖液、醋酸緩沖液、檸檬酸緩沖液 添加鹽的濃度為0.05~0.3 M。
注意
(1) pH值范圍請控制在3.0~10.0。
(2) 如果流動相中含有氯離子,則流動相的pH請高于6。
(3) 可使用的溶劑最大鹽濃度為0.5 M。
(4) 不推薦使用硼酸緩沖液是因為填料中的基團(tuán)會和硼酸發(fā)生反應(yīng)。
2) 非離子性疏水性樣品和離子性疏水性樣品
為了抑制疏水性樣品的疏水性吸附,推薦在流動相中加入有機(jī)溶劑。另外,離子性的樣品還需添加鹽溶液。
注意
色譜柱中的流動相置換成含有機(jī)溶劑的流動相時,流速請控制在0.5 mL/min以下。
使用DMSO時,流速必須控制在0.3 mL/min以下并且色譜柱溫度必須高于50 ℃。
3) 蛋白質(zhì)樣品
尿素和6M胍的水溶液可以作為蛋白質(zhì)的變性劑而用作流動相。膜蛋白質(zhì)這類的在水中溶解性很小的樣品,在溶劑中添加SDS或Brij-35等表面活性劑,效果很好。
注意
因為需要使用濃度較高的變性劑,如果色譜柱的溶劑頻繁更換,可能會縮短色譜柱壽命。所以,推薦使用專用的色譜柱。
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