通過(guò)向樣品中加入硫氰酸胍和還原劑來(lái)破壞細(xì)胞,然后對(duì)其進(jìn)行劇烈搖晃或渦旋。此步驟還將破壞二硫鍵并使樣品中存在的污染蛋白質(zhì)失活。
細(xì)胞裂解后,需要添加苯酚和氯仿-異戊醇以從溶液中分離 RNA 樣品。水相含有的RNA,因此需要將其放入單獨(dú)的試管中,加入異丙醇并離心溶液以沉淀 RNA。
然后用 75% 乙醇洗滌沉淀物,然后去除樣品中的任何雜質(zhì)。
要注意 RNA 與 DNA 相比不太穩(wěn)定,使用前對(duì)其進(jìn)行分離。在處理之前、期間和之后還應(yīng)特別小心,以確保樣品的純度。即使是最少量的 RNase 也會(huì)影響其質(zhì)量。
DNA 和 RNA 也可以通過(guò)提取總核酸部分并將其分成兩部分從同一生物樣品中分離出來(lái)——其中一部分將用 DNase 1 處理,而另一部分將用 RNase A 處理以回收 RNA 和DNA。
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