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磁珠法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有什么?

來源:天津益元利康生物科技有限公司   2023年10月11日 10:27  

磁珠法核酸純化技術(shù)采用了納米級(jí)磁珠微珠,這種磁珠微珠的表面標(biāo)記了一種對(duì)核酸有吸附作用的特定活性官能團(tuán),能同核酸發(fā)生吸附反應(yīng),從而達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的,進(jìn)而獲得純化的核酸。那么磁珠法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有什么呢?讓我們一起來看看吧!

一、步驟

1、樣本處理:核酸必須從細(xì)胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來。

(1)植物組織:液氮研磨或在特殊裂解液中電動(dòng)勻漿;

(2)動(dòng)物組織:液氮研磨或裂解液中手動(dòng)/電動(dòng)勻漿;

(3)血細(xì)胞:應(yīng)用紅細(xì)胞裂解液處理;

(4)細(xì)胞:胰酶處理或蛋白酶K處理。

2、DNA純化:磁珠提前30min從冰箱拿出平衡。磁珠振蕩混勻,取處理完成的裂解液50μl中加入50μl磁珠懸液,按1:1充分混勻,室溫靜置5min,將懸濁液安放在磁力架上,靜置5min至上清清澈,去上清,用75%乙醇或80%乙醇200μl清洗沉淀(現(xiàn)用現(xiàn)配),旋轉(zhuǎn)ep管靜置30s,棄上清。重復(fù)清洗2次,干燥5~10min。

3、DNA溶出:待磁珠無乙醇味,從磁力架上取下ep管,用dH2O或TE溶出DNA,充分混勻,勿用槍頭刮蹭磁珠。靜置2min。再將ep管安放在磁力架上,上清清澈后吸取上清至新的ep管,即可得到DNA溶液。

二、注意事項(xiàng)

1.適用于大多數(shù)動(dòng)植物組織及培養(yǎng)細(xì)胞、全血、尤其適用于微量樣品的DNA提取,但對(duì)于裂解液過于粘稠的樣品不適用。

2.樣本處理時(shí)一定要快速,減少與空氣接觸發(fā)生降解;液氮的量也要適當(dāng)。

3.核酸如果不立即使用,則需至少在-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4.震蕩混勻時(shí)一定要讓磁珠和液體充分接觸,使磁珠更好的吸附DNA。

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