cfDNA（Circulating free DNA）簡稱循環(huán)游離DNA，是指循環(huán)血中游離于細(xì)胞外的部分降解了的機(jī)體內(nèi)源性DNA。正常生理情況下，cfDNA主要來源于衰老凋亡細(xì)胞基因組DNA的降解，當(dāng)機(jī)體發(fā)生疾病時(shí)，如惡性腫瘤、外傷、排異、組織器官衰竭和感染重大疾病等，異常壞死細(xì)胞會(huì)釋放大量DNA進(jìn)入血液循環(huán)。

圖1.cfDNA的來源

游離核酸（cfDNA）是一類高度片段化的 DNA分子，片段分析則呈現(xiàn) 170bp 左右的一個(gè)主峰、340bp 左右的一個(gè)伴峰、510bp 左右的一個(gè)次伴峰以及其他伴峰。

圖2.cfDNA的特點(diǎn)

目前已經(jīng)在血漿、血清、尿液、前列腺液、支氣管灌洗液、唾液、腦脊液、胃液、膽汁、淋巴液、腹腔液及類便中檢測到了游離循環(huán)核酸。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代技術(shù)的發(fā)展，越來越多的研究者和醫(yī)生將基于cfDNA檢測的”液態(tài)活檢”技術(shù)應(yīng)用于產(chǎn)前診斷，腫瘤的篩查，早期診斷，治療監(jiān)測和預(yù)后評估等多個(gè)方面。

為了克服cfDNA在血漿樣本中微量、片段短的痛點(diǎn)和難點(diǎn)，翌圣全新推出MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit（18382ES）,該產(chǎn)品適用于從0.3-4 mL的血漿、血清樣本中的提取游離DNA。

采用cfDNA保存管采集健康人全血，通過離心分離血漿和去除細(xì)胞碎片等雜質(zhì)。提取4個(gè)2mL健康人血漿樣本，50 µl的洗脫體積，并采用Qubit定量，樣本濃度（ng/ µL），結(jié)果顯示，18382相對競品A有更高的提取效率。

圖3.18382對血漿cfDNA的提取能力

采用400 ng梯狀條帶 DNA Lader 分別添加入1 mL模擬血漿和1 mL TE buffer中，并以模擬血漿未加DNA Lader作為陰性對照，如圖4所示，18382ES在不同模擬基質(zhì)樣本中，回收率均在90%以上。

圖4.18382對不同片段長度DNA的提取能力

3個(gè)EDTA抗凝的健康人血漿樣本采用18382ES和競品A提取cfDNA,采用Hieff NGSTM DNA Library Prep Kit（13577ES）對cfDNA進(jìn)行建庫，不同樣本不同提取試劑的文庫濃度和數(shù)據(jù)質(zhì)量如圖5所示，18382提取cfDNA在文庫濃度、數(shù)據(jù)質(zhì)量和插入片段與競品A相當(dāng)。

圖5.18382提取cfDNA的文庫構(gòu)建數(shù)據(jù)質(zhì)量

將5%突變頻率Kars12D標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋為1 ng/uL，制備成模擬cfDNA 。取 10μL 并用 1 mL 血漿稀釋成模擬樣本，采用18382ES和競品A提取模擬cfDNA，取2µL cfDNA進(jìn)行qPCR定量檢測(11211ES)，如圖6所示，低至6 copies/mL的突變片段，18382ES提取之后未出現(xiàn)漏檢的情況。

圖6.18382提取含低頻突變的模擬cfDNA樣本，低頻突變檢出率分析