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DNA-蛋白質(zhì)互作研究解決方案（下）
DNA-蛋白質(zhì)互作研究解決方案（上）介紹了一些表觀組學(xué)技術(shù)研究DNA-蛋白質(zhì)互作，但是有了組學(xué)數(shù)據(jù)，通常還需要一些驗證實驗。
這次，我們來介紹DNA與蛋白質(zhì)互作研究的驗證實驗。
熒光素酶報告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。
雙熒光素酶實驗?zāi)軌蜻M行啟動子活性檢測、轉(zhuǎn)錄因子鑒定、miRNA 與LncRNA/circRNA/mRNA互作等。
圖.轉(zhuǎn)錄因子IRF3對IFN-β啟動子的調(diào)控作用
構(gòu)建Luc-IFN-β啟動子載體和IRF3的過表達載體后進行共轉(zhuǎn)染實驗，之后雙熒光素酶報告基因檢測顯示轉(zhuǎn)錄因子IRF3對IFN-β具有調(diào)控作用
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒HOT | 11402ES60/80 | 100 T/1000 T |
Luciferase Reporter Gene Assay Kit 螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11401ES60/76/80 | 100 T/500 T/1000 T |
pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒陽性對照 | 11556ES03 | 1 μg |
Luciferase Reporter Plasmid negative control （熒光素酶報告基因質(zhì)粒陰性對照） | 11555ES03 | 1 μg |
pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海腎熒光素酶報告基因質(zhì)粒） | 11558ES03 | 1 μg |
酵母雙雜交是將待研究的兩種蛋白質(zhì)分別克隆（融合）到酵母表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子（如GAL4等）的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD）上，構(gòu)建成融合表達載體，從表達產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。
CoIP | GST-pull down | 酵母雙雜交 | |
原理 | 抗原抗體特異性反應(yīng) | GST對谷胱甘肽偶聯(lián)磁珠得特異性 | 真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程 |
檢測瞬時相互作用 | 否 | 否 | 是 |
檢測弱相互作用 | 否 | 否 | 是 |
檢測直接相互作用 | 否 | 是 | 否 |
驗證方式 | 體內(nèi)直接或間接相互作用檢測 | 體外直接得相互作用檢測 | 體內(nèi)直接或間接相互作用檢測 |
是否需要蛋白純化 | 否 | 是 | 否 |
是否需要抗體 | 是 | 否 | 否 |
CoIP實驗步驟
GST-pull down實驗步驟
酵母雙雜交實驗步驟
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
蛋白A/G瓊脂糖純化樹脂 | 36403ES03/05/08/25/60 | 1/2/5/25/100 mL |
蛋白A/G瓊脂糖快速純化樹脂 | 36404ES08/25/60 | 5 /25 /100 mL |
蛋白A/G免疫沉淀磁珠 | 36417ES03/08 | 1/5 mL |
GSTSep Glutathione MagBeads GST標簽蛋白純化磁珠 | 20562ES03/05/08/25 | 1/2/5/25 mL |
X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 | 10903ES25/60/72/76 | 25/100/250/500 mg |
Aureobasidin A(AbA) 金擔(dān)子素A | 60231ES03/08/10 | 1/5/10 mg |
WB/IP裂解液 | 20118ES60 | 100 mL |
蛋白酶抑制劑Cocktail | 20124ES03/10/60/76 | 1/10/100/500 mL |
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