在生物制劑配方的酸堿條件下或者具有脂肪酶/酯酶活性的殘存的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）的催化作用下，吐溫可能發(fā)生水解，見(jiàn)圖 1。吐溫的降解不僅降低了表面活性劑的真實(shí)濃度，而且還與不溶性微粒的形成有關(guān)。中藥注射液和化學(xué)藥品注射液亦是常用吐溫作為增溶劑、乳化劑或分散劑，制劑通常也會(huì)根據(jù)主藥的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行 pH 值的調(diào)節(jié)，弱的酸堿條件下同樣會(huì)導(dǎo)致吐溫的水解。吐溫原料本身的質(zhì)量也有較大的差異，同時(shí)在長(zhǎng)期的儲(chǔ)存和流通中也會(huì)產(chǎn)生不同程度的水解。

對(duì)吐溫原料及其相關(guān)的不同類型制劑中的長(zhǎng)期穩(wěn)定性和安全性的關(guān)注促進(jìn)了吐溫表征和定量的分析方法的發(fā)展。安捷倫公司與科邁恩以及中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院/協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所合作建立了吐溫表征和檢測(cè)的系列方案，如 UHPLC/QTOF 結(jié)合 Polymer Studio 軟件用于吐溫組成和降解產(chǎn)物精細(xì)表征，詳細(xì)內(nèi)容可參考往期微信推送。基于游離脂肪酸結(jié)構(gòu)中無(wú)明顯發(fā)色基團(tuán)，并且抗體制劑中游離脂肪酸的含量較低，選擇了靈敏度高、專屬性強(qiáng)并且操作簡(jiǎn)單的單四極桿質(zhì)譜法來(lái)檢測(cè)游離脂肪酸。安捷倫實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用 ICH Q14 分析方法開(kāi)發(fā)指導(dǎo)原則的 AQbD（analytical Quality by Design）理念開(kāi)發(fā)了基于 UHPLC-MSD 單四極桿質(zhì)譜的游離脂肪酸含量測(cè)定方法。

采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)，配備如下：

色譜柱 Agilent Zorbax SB-C18 2.1 ×50 mm, 1.8 μm

樣品前處理：操作簡(jiǎn)單，進(jìn)行簡(jiǎn)單的蛋白沉淀，離心取上清液過(guò)濾后直接進(jìn)樣分析。

色譜質(zhì)譜條件摸索：基于 ICH Q14 分析方法開(kāi)發(fā)指導(dǎo)原則，進(jìn)行色譜和質(zhì)譜條件的摸索，如下表所示

分析方法色譜條件確定后，并按照 ICH Q2 的要求進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。

用開(kāi)發(fā)的方法對(duì)三個(gè)不同的抗體樣品中的游離脂肪酸進(jìn)行分析，具體結(jié)果如下：

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