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細(xì)胞中的DNA合成途徑分析

來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2023年11月06日 11:55  

  細(xì)胞中的DNA合成有兩條途徑:一條途徑是生物合成途徑(“D途徑”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,為DNA分子的合成提供原料。在此合成過(guò)程中,葉酸作為重要的輔酶參與這一過(guò)程,而HAT培養(yǎng)液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物,可以阻斷DNA合成的“D途徑”。

  另一條途徑是應(yīng)急途徑或補(bǔ)救途徑(“S途徑”),它是利用次黃嘌呤—鳥(niǎo)嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相應(yīng)的核苷酸,兩種酶缺一不可。因此,在HAT培養(yǎng)液中,未融合的效應(yīng)B細(xì)胞和兩個(gè)效應(yīng)B細(xì)胞融合的“D途徑”被氨基蝶呤阻斷,雖“S途徑”正常,但因缺乏在體外培養(yǎng)液中增殖的能力,一般10d左右會(huì)死亡。對(duì)于骨髓瘤細(xì)胞以及自身融合細(xì)胞而言,由于通常采用的骨髓瘤細(xì)胞是次黃嘌呤—鳥(niǎo)嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶缺陷型(HGPRT)細(xì)胞,因此自身沒(méi)有“S途徑”,且“D途徑”又被氨基蝶呤阻斷,所以在HAT培養(yǎng)液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤細(xì)胞與效應(yīng)B細(xì)胞相互融合形成的雜交瘤細(xì)胞,既具有效應(yīng)B細(xì)胞的“S途徑”,又具有骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)液中長(zhǎng)期增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)液中選擇性存活下來(lái),并不斷增殖。

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