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培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿滅菌方法介紹

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2023年11月09日 11:52  

  為了避免雜菌污染,獲得微生物純培養(yǎng)物,培養(yǎng)基必須及時嚴格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0. IMPa (121℃)維持15 ~ 30min即可徹di滅菌。長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa (110℃) 滅菌20 ~ 30min某些對糖類要求更高的培養(yǎng)基,可先將糖過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。長時間高溫滅菌也會使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽離子形成難溶性化合物而產(chǎn)生沉淀。為了防止這類沉淀發(fā)生,可將這些物質(zhì)分別滅菌,冷卻后再混合;也可在培養(yǎng)基中加入少量整合劑(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金屬離子形成可溶性絡合物,防止沉淀的產(chǎn)生。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基 pH降低, 應在配制培養(yǎng)基時加以調(diào)節(jié)。

  干熱滅菌和濕熱滅菌,干熱滅菌方法:包在鐵質(zhì)容器內(nèi),進行高溫烘烤.濕熱用牛皮紙包起來放在高壓鍋中進行高壓滅菌.

  濕熱滅菌、煮沸滅菌和過濾除菌,煮沸滅菌在電磁爐或者微波爐內(nèi)進行煮沸即可,過濾除菌適用于不能高溫處理的培養(yǎng).

  高壓蒸汽滅菌:

  高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛制備過程中混入各種雜菌,分裝后應立即滅菌,至少應在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時一般是在0.105MPa壓力下,溫度121℃時,滅菌15~30min即可。消毒時間不宜過長,也不能超過規(guī)定的壓力范圍,否則有機物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會在高溫下分解,失去營養(yǎng)作用,也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色,甚至難以凝固。

  可將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中,裝水量一般不超過瓶的2/3,用牛皮紙或硫酸紙包扎封口,然后放入高壓鍋中滅菌后即為無菌水。 滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預培養(yǎng)3d,若無污染現(xiàn)象,則證明滅菌是徹di的,可以使用。暫時不用的培養(yǎng)基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應在1周內(nèi)用完,其他培養(yǎng)基最多也不要超過1個月。

  過濾滅菌:

  一些植物生長調(diào)節(jié)劑及有機物,如IAA、GA3、ZT、CM等,遇熱容易分解,不能與培養(yǎng)基一起進行高溫滅菌,而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌。細菌過濾器與濾膜(孔徑0.45微米)使用之前要先進行高壓滅菌。過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中,若為液體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時加入;若為固體培養(yǎng)基,必須在培養(yǎng)基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻。

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