人酶聯(lián)免疫試劑盒(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是一種常用的免疫檢測方法,用于檢測樣本中特定蛋白質(zhì)的存在和濃度。該試劑盒由多個試劑組成,包括固相酶標板、抗體、酶標記抗體和底物等。
ELISA試劑盒的工作原理基于抗原-抗體反應,具體步驟如下:
1. 固相酶標板涂層:將待檢測的抗原或抗體涂覆在酶標板的孔中,使之與酶標抗體結(jié)合形成固相。
2. 樣本處理:將樣本加入涂有抗原或抗體的酶標板孔中,使樣本中的目標物與固相抗原或抗體結(jié)合。
3. 第一次抗體結(jié)合:加入一種與目標物結(jié)合的第一次抗體,與酶標板孔中的抗原或抗體結(jié)合形成夾心復合物。
4. 第二次抗體結(jié)合:加入酶標記的第二次抗體,該抗體能夠與第一次抗體結(jié)合。這種酶標記抗體通常是酶標的蛋白A或蛋白G。
5. 反應底物:加入染色底物,使酶催化產(chǎn)生可定量檢測的顏色反應。通常使用的酶有辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)。
6. 反應終止:加入反應終止劑,阻斷底物的反應,停止顏色的形成。
7. 結(jié)果測定:通過測量底物反應產(chǎn)生的顏色的光密度,使用光譜計或酶標儀測定反應的強度。
ELISA試劑盒應用廣泛,可以檢測多種樣本,包括血清、血漿、尿液、唾液等。ELISA技術(shù)在醫(yī)學、生物學、生物制藥和食品安全等領(lǐng)域得到了廣泛應用,用于診斷疾病、監(jiān)測藥物療效、篩查新藥、檢測食品中的污染物等。
通過ELISA試劑盒,可以快速、準確地檢測目標物的存在和濃度,具有操作簡便、容易標準化、成本低等優(yōu)點,因此被廣泛應用于實驗室和臨床研究中。
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