国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取步驟

來源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2023年11月16日 10:58  

質(zhì)粒DNA的提取是從事基因工程工作中的一項(xiàng)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù),但提取方法有很多種,以下介紹一種最chang用的方法:

堿裂解法:此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取,提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴(kuò)增、銀染序列分析。方法如下:

1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2ml LB培養(yǎng)基。

2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。

3、取1.5ml菌體于Ep管,以4000rpm離心3min,棄上清液。

4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。

5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5 min 。

6、加入0.15m1預(yù)冷溶液III(5 mol/L KAc,pH4.8),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5 min 。

7、以10,000rpm離心20min,取上清液于另一新Ep管

8、加入等體積的異戊醇,混勻后于0℃靜置10min。

9、再以10,000rpm離心20min,棄上清。

10、用70%乙醇0.5ml洗滌一次,抽干所有液體。

11、待沉淀干燥后,溶于0.05mlTE緩沖液中。

煮沸法

1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。

2、棄上清,將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘,使液體流盡。

3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中,渦旋混勻。

4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml),渦旋振蕩3秒鐘。

5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。

7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。

8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。

注意:

1. 對大腸桿菌可從固體培養(yǎng)基上挑取單個菌落直接進(jìn)行煮沸法提取質(zhì)粒DNA。

2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,濃度高時,細(xì)菌裂解效果反而不好。有時不同溶菌酶也能溶菌。

3. 提取的質(zhì)粒DNA中會含有RNA,但RNA并不干擾進(jìn)一步實(shí)驗(yàn),如限制性內(nèi)切酶消化,亞克隆及連接反應(yīng)等。


免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
会东县| 息烽县| 台前县| 嘉黎县| 陇川县| 深圳市| 新乐市| 柳江县| 沿河| 宝丰县| 东乡族自治县| 永善县| 庐江县| 眉山市| 湟源县| 芮城县| 宝应县| 枣庄市| 新野县| 佛冈县| 渝北区| 浦县| 邓州市| 丰县| 化隆| 晴隆县| 宝丰县| 天长市| 白城市| 吴忠市| 日照市| 忻州市| 中方县| 邯郸县| 邓州市| 金昌市| 台安县| 安阳市| 三都| 胶州市| 田阳县|