細胞培養(yǎng)基的基本要求---體外培養(yǎng)的細胞直接生活在培養(yǎng)基中,因此培養(yǎng)基應能滿足細胞對營養(yǎng)成分、促生長因子、滲透壓、pH等諸多方面的要求。
1、營養(yǎng)成分。維持細胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面:
1).氨基酸:是細胞合成蛋白質的原料。所有細胞都需要12種必須氨基酸:纈氨酸、亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪、精氨酸、胱氨酸。此外還需要谷氨酰胺,它在細胞代謝過程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源,同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質。體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內(nèi)都含有必需氨基酸。
2).單糖:培養(yǎng)中的細胞可以進行有氧與無氧酵解,六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細胞對葡萄糖的吸收能力*高,半乳糖*低。體外培養(yǎng)動物細胞時,幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質。
3).維生素:主要扮演輔酶、輔基的角色,不可少。生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B12都是培養(yǎng)基常有的成分。
4).無機離子與微量元素:細胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素,還需要微量元素,如鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。
2、促生長因子及**。各種**、生長因子對于維持細胞的功能、保持細胞的狀態(tài)(分化或未分化)具有十分重要的作用。有些**對許多細胞生長有促生長作用,如胰島素,它能促進細胞利用葡萄糖和氨基酸。有些**對某一類細胞有明顯促進作用,如氫化可的松可促進表皮細胞的生長,泌乳素有促進乳腺上皮細胞生長作用等。
3、滲透壓。細胞必須生活在等滲環(huán)境中,大多數(shù)培養(yǎng)細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細胞的理想滲透壓。鼠細胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于大多數(shù)哺乳動物細胞,滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍都適宜。
4、無毒、無污染。體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質沒有抵抗能力,因此培養(yǎng)基應達到無化學物質污染、無微生物污染(如**、**、支原體、病毒等)、無其他對細胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質污染(如抗體、補體)。
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