原代細胞復蘇的基本操作:
一、實驗準備
(1)儀器:凈化工作臺、離心機、恒溫水浴箱、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、液氮冰箱
(2)玻璃器皿:吸管(彎頭、直頭)、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、廢液缸
(3)塑料器皿:吸頭、槍頭、膠塞、移液管(10ml)、15ml離心管、凍存管(1~2ml)
(4)其他物品:微量加樣槍、紅血球計數(shù)板、記號筆、醫(yī)用橡皮膏、移液槍
(5)試劑:PBS、小牛血清、培養(yǎng)液、雙抗(青霉素、鏈霉素)、胰蛋白酶(0.08%)
二、操作步驟
(1)從液氮容器中取出凍存管,直接浸入37℃溫水中,并不時搖動令其盡快融化。
(2)從37℃水浴中取出凍存管,75%酒精**后,打開蓋子,用吸管吸出細胞懸液,加到離心管中。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
(3)離心,1000rpm,5min。PriCells推薦不離心。
(4)棄去上清液,加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞,計數(shù),調整細胞密度,接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。PriCells推薦小牛血清濃度依據(jù)原代細胞種類。
(5)次日更換一次1/2培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。