海藻糖是一類新興的蛋白保護(hù)劑,可有效保護(hù)蛋白酶在不同條件下的活性,具體保護(hù)機(jī)制已有相關(guān)
研究分析,本篇文章向大家介紹清華大學(xué)楊小民等的研究成果。
該研究通過測(cè)量海藻糖、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖以及纖維素酶與這些糖的混合物的紅外光譜和差示
掃描量熱譜圖,比較糖和纖維素酶分子之間的相互作用,以深入研究海藻糖對(duì)纖維素酶的保護(hù)機(jī)理。
通過比較糖和纖維素酶及其混合物的紅外(IR)譜圖,判斷海藻糖、葡萄糖和蔗糖原有氫鍵的作用
形式發(fā)生了改變,纖維素酶和糖分子之間形成了氫鍵。而纖維素酶對(duì)葡聚糖的紅外光譜特征頻率
沒有影響,說明酶和葡聚糖分子之間沒有明顯的相互作用。此外,紅外譜圖還表明,海藻糖、葡萄糖和蔗糖的羥基與纖維素酶分子的酰胺基之間存在比較強(qiáng)的分子間作用力。
根據(jù)差示掃描量熱譜圖結(jié)果,測(cè)得海藻糖玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為107℃,相轉(zhuǎn)變溫度為123℃,葡聚糖玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為92℃,相轉(zhuǎn)變溫度為132℃。葡萄糖和蔗糖沒有玻璃化轉(zhuǎn)變現(xiàn)象。說明海藻糖和葡聚糖都存在玻璃化轉(zhuǎn)變溫度且溫度較高,其在比較高的溫度下仍可處于玻璃態(tài)。
圖1 海藻糖、葡聚糖、葡萄糖和蔗糖的差示掃描量熱譜圖
差示掃描量熱譜圖顯示,纖維素酶的物理熱變性溫度為120℃,在添加海藻糖之后,物理熱變性溫度
為120℃,在添加海藻糖之后,物理熱變性溫度提高到137℃,添加葡萄糖后該物理熱變性溫度提高到140℃,說明海藻糖和葡萄糖同纖維素酶的分子之間存在較強(qiáng)的分子間作用力,且該作用力增加了酶分子空間結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性。
圖2 纖維素酶與糖混合物的差示掃描量熱譜圖
綜合以上結(jié)果,葡萄糖和蔗糖在高溫下,其羥基可以替代水分子同纖維素酶分子表面的酰胺基形成氫
鍵,但實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn),高溫下葡萄糖和蔗糖與酶的混合物發(fā)生明顯的褐變現(xiàn)象,說明有化學(xué)反應(yīng)發(fā)
生,差示掃描也說明葡萄糖和蔗糖在高溫下不能形成玻璃態(tài),因此高溫下葡萄糖與蔗糖無法保護(hù)纖維素酶的酶活性。
葡聚糖的羥基不能與纖維素酶分子形成氫鍵,但在高溫下能形成玻璃態(tài)對(duì)酶分子進(jìn)行保護(hù)。
海藻糖的羥基與纖維素酶的酰胺基以氫鍵形式結(jié)合,提高了酶的熱變性溫度。海藻糖分子包裹在酶
分子周圍或填充在酶蛋白分子空間結(jié)構(gòu)內(nèi),特別是酶活性部位附近,并在酶分子內(nèi)外部形成玻璃態(tài),
將酶蛋白的空間結(jié)構(gòu)固定住,從而保護(hù)酶活性。相比之下,海藻糖在上述四種糖類中能夠?yàn)槔w維素
蛋白酶提供**的保護(hù)作用。
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