細(xì)胞培養(yǎng)怕支原體污染，但有一些被污染的細(xì)胞不能被丟棄時(shí)該怎么辦？接下來一起來了解一下吧

如何祛除細(xì)胞上的支原體污染？

據(jù)研究表明，約98％的支原體存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞間隙。支原體直徑約180~350nm，比細(xì)胞小很多，經(jīng)低速離心與細(xì)胞分離。通過反復(fù)懸浮沖洗、離心，加上使用我們的Zell Shield，即可在細(xì)胞培養(yǎng)四代以內(nèi)有效地祛除支原體。

什么是Zell Shield？

Zell Shield是一種鏈青霉素類復(fù)合抗生素，對(duì)細(xì)胞影響很小，可以有效抑制細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體、細(xì)菌、霉菌、真菌等微生物增殖。普通的鏈霉素、青霉素對(duì)支原體沒有效果。

具體是怎么操作呢？

1.首先把被支原體污染的細(xì)胞消化下來，放入離心管離心，棄上清。再加入干凈的PBS懸浮沖洗細(xì)胞、低速離心（300~500r/min）、棄上清，反復(fù)三次。這樣可祛除細(xì)胞表面60％~70％的支原體，支原體還剩約30％~40％.

2.細(xì)胞加入含1％Zell Shield的新鮮培養(yǎng)基，傳代培養(yǎng)。這時(shí)因培養(yǎng)基中Zell Shield的抑制作用細(xì)胞培養(yǎng)過程中，雖然細(xì)胞增殖，但殘留的支原體無法增殖。細(xì)胞需再次傳代時(shí)，把第二代細(xì)胞消化下來，離心，棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，反復(fù)三次，這時(shí)，細(xì)胞上殘留的支原體大約已剩余為初污染量的10％左右。

3.細(xì)胞加入含1％Zell Shield?的新鮮培養(yǎng)基，傳代培養(yǎng)。需再次傳代時(shí)把第三代細(xì)胞消化下來，離心，棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，反復(fù)三次，可再次祛除60％~70％的殘余支原體，通過沖洗、抑制、換液等操作，細(xì)胞中支原體的殘留污染量大約只剩3％左右。

4.細(xì)胞加入含1％Zell Shield?的新鮮培養(yǎng)基，傳代培養(yǎng)。

需再次傳代時(shí)把第四代細(xì)胞消化下來，離心，棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，反復(fù)三次，可再次祛除60％~70％的支原體，此時(shí)，支原體殘留量大約已低于1％.支原體的增殖亦有密度要求，用Zell Shield處理過四代的細(xì)胞，即便撤掉Zell Shield，只要保證沒有新的支原體人為再次帶入，原有支原體也無法再增殖，隨著傳代，換液，支原體的老化、死亡，細(xì)胞中的支原體污染基本就徹di解決了。

敲黑板，劃重點(diǎn)啦！

1.每次傳代時(shí)，重復(fù)三次對(duì)細(xì)胞懸浮沖洗步驟非常重要，操作要正確、規(guī)范，以達(dá)-佳效果！

2.在培養(yǎng)基中加入1％Zell Shield?抑制支原體增殖！

3.使用安全的血清、培養(yǎng)基等試劑，不再有新的支原體加入！

做到以上三點(diǎn)即可確保祛除支原體污染。

Zell Shield工作原理是什么？

支原體祛除劑Zell Shield（培養(yǎng)基用）是一種即用型鏈青霉素類的復(fù)合抗生素，在培養(yǎng)基中1%的濃度通過阻止原核生物DNA及蛋白的合成，抑制細(xì)胞培養(yǎng)中遇到的細(xì)菌、真菌、霉菌增殖，更可以有效、精-確地抑制支原體增殖，且對(duì)細(xì)胞基本安全。

品名：支原體祛除劑Zell Shield（培養(yǎng)基用）

供應(yīng)商：遠(yuǎn)慕生物

規(guī)格：50mL/瓶

儲(chǔ)存溫度：-18℃

使用注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)室初次使用，注意分裝，分裝后的小包裝Zell Shield?仍-20℃避光冷凍保存，現(xiàn)配現(xiàn)用。