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如何祛除細(xì)胞上的支原體污染?

來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2023年12月01日 10:26  

細(xì)胞培養(yǎng)怕支原體污染,但有一些被污染的細(xì)胞不能被丟棄時(shí)該怎么辦?接下來(lái)一起來(lái)了解一下吧

如何祛除細(xì)胞上的支原體污染?

據(jù)研究表明,約98%的支原體存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞間隙。支原體直徑約180~350nm,比細(xì)胞小很多,經(jīng)低速離心與細(xì)胞分離。通過(guò)反復(fù)懸浮沖洗、離心,加上使用我們的Zell Shield,即可在細(xì)胞培養(yǎng)四代以內(nèi)有效地祛除支原體。

什么是Zell Shield?

Zell Shield是一種鏈青霉素類復(fù)合抗生素,對(duì)細(xì)胞影響很小,可以有效抑制細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體、細(xì)菌、霉菌、真菌等微生物增殖。普通的鏈霉素、青霉素對(duì)支原體沒(méi)有效果。

具體是怎么操作呢?

1.首先把被支原體污染的細(xì)胞消化下來(lái),放入離心管離心,棄上清。再加入干凈的PBS懸浮沖洗細(xì)胞、低速離心(300~500r/min)、棄上清,反復(fù)三次。這樣可祛除細(xì)胞表面60%~70%的支原體,支原體還剩約30%~40%.

2.細(xì)胞加入含1%Zell Shield的新鮮培養(yǎng)基,傳代培養(yǎng)。這時(shí)因培養(yǎng)基中Zell Shield的抑制作用細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,雖然細(xì)胞增殖,但殘留的支原體無(wú)法增殖。細(xì)胞需再次傳代時(shí),把第二代細(xì)胞消化下來(lái),離心,棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清,反復(fù)三次,這時(shí),細(xì)胞上殘留的支原體大約已剩余為初污染量的10%左右。

3.細(xì)胞加入含1%Zell Shield?的新鮮培養(yǎng)基,傳代培養(yǎng)。需再次傳代時(shí)把第三代細(xì)胞消化下來(lái),離心,棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清,反復(fù)三次,可再次祛除60%~70%的殘余支原體,通過(guò)沖洗、抑制、換液等操作,細(xì)胞中支原體的殘留污染量大約只剩3%左右。

4.細(xì)胞加入含1%Zell Shield?的新鮮培養(yǎng)基,傳代培養(yǎng)。

需再次傳代時(shí)把第四代細(xì)胞消化下來(lái),離心,棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清,反復(fù)三次,可再次祛除60%~70%的支原體,此時(shí),支原體殘留量大約已低于1%.支原體的增殖亦有密度要求,用Zell Shield處理過(guò)四代的細(xì)胞,即便撤掉Zell Shield,只要保證沒(méi)有新的支原體人為再次帶入,原有支原體也無(wú)法再增殖,隨著傳代,換液,支原體的老化、死亡,細(xì)胞中的支原體污染基本就徹di解決了。

敲黑板,劃重點(diǎn)啦!

1.每次傳代時(shí),重復(fù)三次對(duì)細(xì)胞懸浮沖洗步驟非常重要,操作要正確、規(guī)范,以達(dá)-佳效果!

2.在培養(yǎng)基中加入1%Zell Shield?抑制支原體增殖!

3.使用安全的血清、培養(yǎng)基等試劑,不再有新的支原體加入!

做到以上三點(diǎn)即可確保祛除支原體污染。

Zell Shield工作原理是什么?


支原體祛除劑Zell Shield(培養(yǎng)基用)是一種即用型鏈青霉素類的復(fù)合抗生素,在培養(yǎng)基中1%的濃度通過(guò)阻止原核生物DNA及蛋白的合成,抑制細(xì)胞培養(yǎng)中遇到的細(xì)菌、真菌、霉菌增殖,更可以有效、精-確地抑制支原體增殖,且對(duì)細(xì)胞基本安全。

品名:支原體祛除劑Zell Shield(培養(yǎng)基用)

供應(yīng)商:遠(yuǎn)慕生物

規(guī)格:50mL/瓶

儲(chǔ)存溫度:-18℃

使用注意事項(xiàng):實(shí)驗(yàn)室初次使用,注意分裝,分裝后的小包裝Zell Shield?仍-20℃避光冷凍保存,現(xiàn)配現(xiàn)用。

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