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人源重組蛋白抗體原料——博邁倫生物

來(lái)源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2023年12月01日 10:52  

人源重組蛋白抗體是一類廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物研究中的重要蛋白質(zhì)藥物。它們是通過(guò)基因工程技術(shù)將人源基因序列克隆到表達(dá)載體中,再在適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞中表達(dá),從而獲得具有抗體結(jié)構(gòu)和功能的重組蛋白質(zhì)。

 

以下是人源重組蛋白抗體的原料制備和純化的一般步驟:

 

1. 基因克?。哼x擇具有特定抗體活性的人源基因序列,并將其克隆至適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中。這通常涉及基于PCR技術(shù)擴(kuò)增相關(guān)基因片段,并利用適當(dāng)?shù)南拗泼笇⑵溥B接到表達(dá)載體中。

 

2. 表達(dá)宿主細(xì)胞培養(yǎng):將表達(dá)載體導(dǎo)入適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞中,如大腸桿菌、CHO細(xì)胞等,并進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)條件需要提供適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和生長(zhǎng)因子,以確保細(xì)胞的適宜生長(zhǎng)和目標(biāo)蛋白質(zhì)的表達(dá)。

 

3. 抗體表達(dá):一旦細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到一定密度,可以使用適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)因子(如IPTG)來(lái)誘導(dǎo)目標(biāo)蛋白質(zhì)的表達(dá)。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的誘導(dǎo)后,細(xì)胞將開(kāi)始表達(dá)目標(biāo)抗體。

 

4. 細(xì)胞破碎:使用機(jī)械或化學(xué)方法破碎細(xì)胞,以釋放細(xì)胞內(nèi)部的目標(biāo)抗體。這個(gè)步驟可以通過(guò)離心等方法去除細(xì)胞碎片和細(xì)胞核等非溶解物質(zhì)。

 

5. 親和層析:利用親和層析柱,使用與目標(biāo)抗體特異結(jié)合的配體,如蛋白A/G或蛋白L,實(shí)現(xiàn)目標(biāo)抗體的選擇性結(jié)合。這個(gè)步驟可以去除大部分雜質(zhì),并在繼續(xù)純化過(guò)程中提高目標(biāo)抗體的純度。

 

6. 洗脫:經(jīng)過(guò)親和層析后,通過(guò)使用適當(dāng)?shù)木彌_液或條件改變,將目標(biāo)抗體從親和層析柱上洗脫下來(lái)。這個(gè)步驟有助于去除不需要的成分和與抗體結(jié)合的雜質(zhì)。

 

7. 濃縮與純化:將洗脫得到的目標(biāo)抗體通過(guò)濃縮技術(shù)(如超濾或離心濃縮)濃縮為較小的體積,并除去溶劑。然后可以使用其他純化技術(shù),如離子交換層析、凝膠過(guò)濾、透析等,進(jìn)一步純化。

 

8. 分析和鑒定:通過(guò)使用技術(shù)如SDS-PAGE、Western blot、質(zhì)譜等,對(duì)純化的抗體進(jìn)行鑒定。這些技術(shù)可以評(píng)估抗體的分子量、純度、亞型和抗原結(jié)合特性。


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