人源重組蛋白抗體是一類廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物研究中的重要蛋白質(zhì)藥物。它們是通過基因工程技術(shù)將人源基因序列克隆到表達載體中,再在適當(dāng)?shù)乃拗骷毎斜磉_,從而獲得具有抗體結(jié)構(gòu)和功能的重組蛋白質(zhì)。
以下是人源重組蛋白抗體的原料制備和純化的一般步驟:
1. 基因克隆:選擇具有特定抗體活性的人源基因序列,并將其克隆至適當(dāng)?shù)谋磉_載體中。這通常涉及基于PCR技術(shù)擴增相關(guān)基因片段,并利用適當(dāng)?shù)南拗泼笇⑵溥B接到表達載體中。
2. 表達宿主細胞培養(yǎng):將表達載體導(dǎo)入適當(dāng)?shù)乃拗骷毎?,如大腸桿菌、CHO細胞等,并進行細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)條件需要提供適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和生長因子,以確保細胞的適宜生長和目標(biāo)蛋白質(zhì)的表達。
3. 抗體表達:一旦細胞培養(yǎng)達到一定密度,可以使用適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)因子(如IPTG)來誘導(dǎo)目標(biāo)蛋白質(zhì)的表達。經(jīng)過一定時間的誘導(dǎo)后,細胞將開始表達目標(biāo)抗體。
4. 細胞破碎:使用機械或化學(xué)方法破碎細胞,以釋放細胞內(nèi)部的目標(biāo)抗體。這個步驟可以通過離心等方法去除細胞碎片和細胞核等非溶解物質(zhì)。
5. 親和層析:利用親和層析柱,使用與目標(biāo)抗體特異結(jié)合的配體,如蛋白A/G或蛋白L,實現(xiàn)目標(biāo)抗體的選擇性結(jié)合。這個步驟可以去除大部分雜質(zhì),并在繼續(xù)純化過程中提高目標(biāo)抗體的純度。
6. 洗脫:經(jīng)過親和層析后,通過使用適當(dāng)?shù)木彌_液或條件改變,將目標(biāo)抗體從親和層析柱上洗脫下來。這個步驟有助于去除不需要的成分和與抗體結(jié)合的雜質(zhì)。
7. 濃縮與純化:將洗脫得到的目標(biāo)抗體通過濃縮技術(shù)(如超濾或離心濃縮)濃縮為較小的體積,并除去溶劑。然后可以使用其他純化技術(shù),如離子交換層析、凝膠過濾、透析等,進一步純化。
8. 分析和鑒定:通過使用技術(shù)如SDS-PAGE、Western blot、質(zhì)譜等,對純化的抗體進行鑒定。這些技術(shù)可以評估抗體的分子量、純度、亞型和抗原結(jié)合特性。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。