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食品及飼料中伏馬毒素的檢測(cè)-柱前衍生及柱后衍生法

來(lái)源:北京中檢維康生物技術(shù)有限公司   2023年12月04日 17:17  

? 關(guān)于伏馬毒素  ?

   伏馬毒素 (Fumonisin FB) 是一種霉菌毒素,是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。主要污染糧食及其制品,并對(duì)某些家畜產(chǎn)生急性毒性及潛在的致癌性,已成為繼黃曲霉毒素之后的又一研究熱點(diǎn)。目前我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素XIAN量》(GB2761-2017)尚未涉及伏馬毒素的XIAN量,不過在《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 13078—2017)規(guī)定了部分飼料原料和飼料產(chǎn)品中的FB1和FB2總量的XIAN量標(biāo)準(zhǔn)。其中飼料原料玉米及其加工產(chǎn)品、玉米酒糟類產(chǎn)品、玉米青貯飼料和玉米秸稈中伏馬毒素的XIAN量為 60 mg/kg,其他飼料產(chǎn)品中伏馬毒素的XIAN量在5~50 mg/kg。

? 關(guān)于檢測(cè)方法?

GB 5009.240-2023 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中伏馬菌素的測(cè)定 (將于2024年3月實(shí)施)

LS/T 6130-2017 糧油檢驗(yàn) 糧食中伏馬毒素B1、B2的測(cè)定 超高效液相色譜法

本方案采用IAC-107伏馬毒素免疫親和柱

IAC-107伏馬毒素免疫親和柱能夠特異性的純化與濃縮樣品中的伏馬毒素B1 、B2 、B3 . 伏馬毒素免疫親和柱廣泛地應(yīng)用于糧食、食品、飼料、等樣品的提取,該方法速度快、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高,對(duì)準(zhǔn)確靈敏的測(cè)定樣品中的伏馬毒素起到十分重要的作用。

? 操作流程?

一、樣品前處理

1.樣品提取及稀釋


1.1 取25.0g(精確到0.1g)過篩樣品于均質(zhì)杯中,加入乙腈水(5+5) 100mL,以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取20min,定量濾紙過濾。


1.2 移取2.0mI濾液加入48mL0.1%的吐溫/PBS稀釋混勻。


2.樣品凈化


2.1將免疫親和柱連接于玻璃注射器下準(zhǔn)確移取50.0mL上述樣品溶液注入玻注射器中。

2.2將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s的流速緩慢通過免疫親和柱,直至空氣進(jìn)入親和柱中。

2.3用10mL水淋洗親和柱流速為1滴/s~2滴/s.直至空氣進(jìn)入親和柱中,棄去全部流出液,抽干小柱。

2.4準(zhǔn)確加入3mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 洗脫流速約為1滴/s,收集洗脫液。50°C下氮?dú)鉂饪s吹干后,用乙腈水 (5+5) 定容至1 mL,待檢測(cè)。

二、液相條件及衍生方法

柱前衍生法

色譜柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流動(dòng)相: 甲醇:0.1MNaH2PO4(77: 23 體積比)用磷酸將PH值調(diào)到3.3

檢測(cè)器: 激發(fā)波長(zhǎng)335nm 發(fā)射波長(zhǎng)440nm

進(jìn)樣體積: 20uL

衍生方法:取100uL標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品凈化液于進(jìn)樣瓶中加入100uL OPA衍生試劑A渦旋混合30s,在 2分鐘內(nèi)進(jìn)樣分析。

柱后衍生法

色譜柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流動(dòng)相: 甲醇/(65+35)

檢測(cè)器:激發(fā)波長(zhǎng)335nm發(fā)射波長(zhǎng)440mm

進(jìn)樣體積: 20uL

衍生泵流速: 0.4mL/min

衍生溫度: 50℃

衍生泵流動(dòng)相: OPA行生試劑B

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HP-L10柱后衍生系統(tǒng)  

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HP-L20柱后衍生系統(tǒng)

? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果?

1、效回收:



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2、樣品添加回收:取玉米樣品,伏馬B1B2B3混標(biāo)添加各1000ppb。

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3、標(biāo)準(zhǔn)品及樣品圖譜

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1  柱前衍生標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖(出峰順序B1,B3,B2)

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2  柱后衍生標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖(出峰順序B1,B3,B2)

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3  玉米本底液相色譜圖
圖片      圖4  玉米加標(biāo)液相色譜圖
? 訂購(gòu)信息?
本方案所需要的產(chǎn)品及儀器見下表


C/N編號(hào)

物品

HP-L10

HP-L20

CLOVER柱后衍生裝置

C1015

鄰苯二甲醛 (HPLC 法用)

C1016

2-疏基乙醇(HPLC 法用)

ZJ0612

科樂福 CLOVER 多位位泵流操作架(配有1臺(tái)空氣泵,6個(gè)10mL 針簡(jiǎn))

20202

高速勻質(zhì)器,轉(zhuǎn)速可達(dá) 18.000 r/in~22.000 r/min

31955-C

科樂福 CLOVER微纖維濾紙   (1.5um100 /)

31240-C

折疊式槽紋濾紙 (100 /),或中速定性濾紙

36010-C

一次性塑料燒杯(25/)

34000-C

一次性無(wú)熒光測(cè)試管(250 /)

36020-C

塑料漏斗(10 個(gè)/)

CLOVER-1ST7224/5/6

伏馬毒素標(biāo)準(zhǔn)品 B1/B2/B3

35016

色譜純級(jí)的甲醇(4/)

C546150-U

科樂福 Cloversil C18 反相色譜柱 4.6*150mm (5um)

C546250-U

科樂福 Cloversil C18 反相色譜柱 4.6*250mm (5um)

FCMF3-CCP320C

玉米、飼料等基質(zhì)含有不同水平伏馬毒素的質(zhì)控樣品(FAPAS/Trilogy)



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