磷酸二酯酶 (PDE) 在 cAMP 和 cGMP 信號傳導(dǎo)的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。PDE4D 具有 3',5'-環(huán)狀 AMP 磷酸二酯酶活性并降解 cAMP。PDE4D 抑制劑對 PDE4D 活性的抑制導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi) cAMP 水平升高。PDE4D 基因編碼至少 9 種不同的亞型，并與中風(fēng)、哮喘、心律失常和心肌病有關(guān)，使其成為重要的治療靶點(diǎn)。

基于 PDE4D 細(xì)胞的活性測定旨在篩選培養(yǎng)細(xì)胞中的 PDE4D7 抑制劑。該測定基于用 CRE 熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞。CRE 報(bào)告基因包含受 cAMP 反應(yīng)元件 (CRE) 控制的螢火蟲熒光素酶基因。細(xì)胞內(nèi) cAMP 升高會激活 CRE 結(jié)合蛋白 (CREB) 與 CRE 結(jié)合并誘導(dǎo)熒光素酶的表達(dá)。在細(xì)胞生理學(xué)研究中，毛喉素通常用于提高細(xì)胞內(nèi) cAMP 水平。當(dāng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CRE報(bào)告基因的細(xì)胞被毛喉素激活時(shí)，細(xì)胞內(nèi)cAMP水平上調(diào)，從而誘導(dǎo)CRE熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)。然而，當(dāng)細(xì)胞用 PDE4D7 表達(dá)載體和 CRE 報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染時(shí)，毛喉素誘導(dǎo)的 cAMP 水平降低，導(dǎo)致熒光素酶表達(dá)水平降低。當(dāng)細(xì)胞用 PDE4D 抑制劑處理以抑制 PDE4D7 活性時(shí)，cAMP 水平恢復(fù)，從而導(dǎo)致更高的熒光素酶活性。

艾美捷PDE4D基于細(xì)胞的報(bào)告基因檢測試劑盒：

貨號：60505

英文名稱：PDE4D Cell-Based Reporter Assay Kit

規(guī)格：500 rxns.

同義詞：PDE4D、磷酸二酯酶 4D、PDE4D 細(xì)胞活性測定試劑盒、細(xì)胞測定試劑盒、細(xì)胞測定、報(bào)告基因測定試劑盒

提供方式：該試劑盒包括 CRE 熒光素酶報(bào)告基因（與組成型表達(dá)的海腎（海三色堇）熒光素酶載體預(yù)混合，作為轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)部對照）和 PDE4D7 表達(dá)載體

需要但未提供的材料：

• 哺乳動(dòng)物細(xì)胞系和適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)基

• 96 孔組織培養(yǎng)處理的白色透明底測定板（Corning # 3610）

• 哺乳動(dòng)物細(xì)胞系轉(zhuǎn)染試劑

• Opti-MEM I 低血清培養(yǎng)基 (Invitrogen #31985-062)

• Forskolin (Sigma Aldrich #F3917)

• 兩步熒光素酶（Firefly 和 Renilla）檢測系統(tǒng)：

兩步熒光素酶(Firefly & Renilla) 檢測系統(tǒng) (BPS Bioscience, #60683)：該系統(tǒng)直接在生長培養(yǎng)基中檢測細(xì)胞。它可以與任何光度計(jì)一起使用。不需要自動(dòng)注射器。

• 光度計(jì)

PDE4D基于細(xì)胞的報(bào)告基因檢測試劑盒數(shù)據(jù)：

PDE4D基于細(xì)胞的報(bào)告基因檢測試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Montminy MR et al. (1987). Nature  328(6126):175-178

2. Fan Chung, K. (2006). Eur. J. Pharmacol.  533(1-3):110-117

3. Malik, R. et al. (2008). Appl. Microbiol. Biotechnol. 77(5): 1167-1173